MDCK細胞的生長和放大(2% FBS)
為了研究在 Cellbag 生物反應器中 MDCK細胞擴增的可放大性,在兩種不同大小的袋子之間比較最大細胞密度和細胞生長速率 Cellbag-10 L和 Cellbag-50 L。 袋子的工作培養體積采用最大工作體積的40%(即Cellbag-10 L中為2 L, Cellbag-50 L中為10 L)。
微載體用量為3 g/l的 Cytodex3, 接種細胞密度為0.3×106細胞/ml。MDCK細胞采用搖動速度8 rpm和 5o角度混合。細胞培養期間,在保持角度不變的條件下將搖動速度以階梯方式逐漸從 8 rpm 提高到 14 rpm。培養溫度 37℃,pH 7.4,并監測溶氧水平,細胞培養基中含有2% FBS。
經過最初的延滯期后,細胞終密度達到3×106細胞/ml,和在轉瓶(Spinner Flask)中所獲得的最大細胞密度類似。 2L和 10L培養體積的細胞生長狀況類似,因此顯示出良好的可放大性(圖12)。
圖 12. 對于 2 L和 10 L的培養體積,MDCK細胞的生長狀況類似,表明 WAVE良好的可放大性。
Vero細胞在Cytodex 1和Cytodex 3微載體上無血清培養條件下的生長
接種量為4×105細胞/ml 的Vero細胞在含有2 L無血清培養基的Cellbag-10 L中的分別進行Cytodex 1和 Cytodex 3培養。細胞經過間歇搖動混合6 h (16 rpm和4.5o下2 min, 然后0 rpm和 0o 停止搖動18 min)。圖13A顯示Vero細胞在Cytodex 3上培養6 h 后完全鋪展,但是在Cytodex 1上細胞沒有鋪展開來(圖 13 B)。為了提高Vero細胞在 Cytodex 1上的鋪展,培養物停止搖動2 h,改進了細胞在Cytodex 1上鋪展狀況(圖13 C)。之后,在 37℃下兩種培養物都采用連續搖動的方式繼續培養(11 rpm和4.5o)。
Cytodex 1
Cytodex 3
圖 13.Vero細胞貼附到微載體后的形態。接種后 6 h和 8 h。