支原體的檢測實驗_相差顯微鏡檢測法
實驗材料細胞儀器、耗材培養瓶載物片蓋片顯微鏡實驗步驟1. 標本制備用尖鑷子從培養瓶中直接取出預先置入的支持物(長形蓋片;24 小時前置入),令細胞面向上,置放在載物片上,再覆以24 mmX 36 mm的較大蓋片;如不用支持物培養法,也可取少許培養液滴在載物片上,再覆以蓋片法觀察亦可。2. 觀察相差顯微鏡油浸下觀察,支原體呈暗色微小顆粒,有類似布朗運動的表現,多位于細胞表面和細胞之間。注意事項1. 支原體與細胞破碎后溢出的細胞內容物如線粒體等頗相似,應細加區別。......閱讀全文
支原體的檢測實驗_相差顯微鏡檢測法
實驗材料細胞儀器、耗材培養瓶載物片蓋片顯微鏡實驗步驟1. ?標本制備用尖鑷子從培養瓶中直接取出預先置入的支持物(長形蓋片;24 小時前置入),令細胞面向上,置放在載物片上,再覆以24 mmX 36 mm的較大蓋片;如不用支持物培養法,也可取少許培養液滴在載物片上,再覆以蓋片法觀察亦可。2. ?觀察相
支原體的檢測實驗_培養檢測法
實驗方法原理這是用支原體培養基方法進行檢測,培養法稍顯繁鎖,但比較精確。實驗材料肉湯血清試劑、試劑盒細胞懸液儀器、耗材培養基實驗步驟1. ?肉湯制備用支原體肉湯(Sigma 產)和北京生物制品所制兩種均可;用前加10%馬血清;2. ?培養每45 ml肉湯培養基加2.5×106?/ml細胞懸液5 ml
支原體的檢測實驗_電鏡檢測法
實驗方法原理在用一般方法難以確定時,可做電鏡檢測。實驗材料細胞試劑、試劑盒胰蛋白酶儀器、耗材吸管實驗步驟1. ?細胞培養 48~72 小時。2. ?接近匯合前,用0.05%~0.25%胰蛋白酶消化細胞5~10 分鐘。3. ?用吸管輕輕吹打,制備成細胞懸液。
支原體的檢測實驗
相差顯微鏡檢測法 低漲處理地衣紅染色觀察法 熒光染色法 電鏡檢測法 培養檢測法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 細胞
PCR法檢測支原體
實驗方法原理PCR法的基本原理是酶促DNA合成反應,即在DNA模板、引物和脫氧核糖核酸存在下,經DNA聚合酶的作用,使DNA鏈擴增延伸。實驗材料細胞樣品試劑、試劑盒dNTPTapDNA聚合酶瓊脂糖礦物油支原體檢測試劑盒儀器、耗材超凈工作臺PCR儀電泳儀凝膠成像分析系統臺式離心機旋渦混懸器實驗步驟1.
PCR法檢測支原體
PCR法是20世紀80年代中期建立起來的一種體外DNA擴增技術,其基本原理是酶促DNA合成反應,即在DNA模板、引物和脫氧核糖核酸存在下,經DNA聚合酶的作用,使DNA 鏈擴增延伸。該方法具有靈敏度高、特異性強、快速的特點,但其對實驗環境的要求嚴格,實驗成本較高,有時還有假陽性的現象出現。1、儀器設
PCR法檢測支原體
PCR法是20世紀80年代中期建立起來的一種體外DNA擴增技術,其基本原理是酶促DNA合成反應,即在DNA模板、引物和脫氧核糖核酸存在下,經DNA聚合酶的作用,使DNA 鏈擴增延伸。該方法具有靈敏度高、特異性強、快速的特點,但其對實驗環境的要求嚴格,實驗成本較高,有時還有假陽性的現象出現。1、儀
培養法檢測支原體
培養法最為可靠且成本低廉,但培養周期較長。常用于細胞以及I臨床治療細胞的支原體檢查。1、所需儀器設備及培養基(1)儀器設備:培養箱,顯微鏡。(2)培養基①支原體肉湯培養基。②精氨酸肉湯培養基。③支原體瓊脂培養基。2、檢查方法(1)樣品的貯存:樣品如在24h以內進行支原體檢測,則可貯存在2—8℃;如果
ELISA法檢測肺炎支原體
ELISA法檢測肺炎支原體 肺炎支原體可引起支原體肺炎,曾被稱為“非典型肺炎”。支原體肺炎通常起病緩慢,病情嚴重,體征輕微,肺炎常為間質性。此外,肺炎支原體與人腦組織有共同抗原,故亦可引起中樞神經系統癥狀。臨床上一般通過檢查肺炎支原體抗體IgG、IgM診斷支原體肺炎。 (一)肺炎支原體抗體I
支原體的檢測
實驗材料 細胞儀器、耗材 培養瓶載物片蓋片顯微鏡實驗步驟 1. ?標本制備用尖鑷子從培養瓶中直接取出預先置入的支持物(長形蓋片;24 小時前置入),令細胞面向上,置放在載物片上,再覆以24 mmX 36 mm的較大蓋片;如不用支持物培養法,也可取少許培養液滴在載物片上,再覆以蓋片法觀察亦可。2. ?
支原體的檢測實驗_熒光染色法
實驗方法原理熒光顯微鏡檢查法,熒光染料用 Hoechst 33258,它是一種能與DNA 特異結合的熒光染料。支原體內含有DNA,能著色,是現有檢測法中最方便和最有效的一種。實驗材料細胞試劑、試劑盒Hanks醋酸甲醇蒸餾水儀器、耗材蓋片顯微鏡實驗步驟1. ?標本蓋片培養細胞匯合前從瓶中取出(如細胞已
熒光檢測支原體
實驗方法原理在無抗生素情況下,至少將細胞培養一周,將培養上清轉移至處于對數生長早期的指示細胞中,孵育 3~5d ,將細胞固定和染色,尋找細胞核之外的熒光。實驗材料來自于7天單層培養的無抗生素的細胞培養上清液或經離心后的上清液 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
熒光檢測支原體
實驗方法原理在無抗生素情況下,至少將細胞培養一周,將培養上清轉移至處于對數生長早期的指示細胞中,孵育 3~5d ,將細胞固定和染色,尋找細胞核之外的熒光。實驗材料來自于7天單層培養的無抗生素的細胞培養上清液或經離心后的上清液指示細胞試劑、試劑盒Hoechst 33258 染料BSS-PRD-PBSA
支原體的檢測實驗_低漲處理地衣紅染色觀察法
實驗方法原理本法為固定染色法,簡便易行,標本可長期保存,不僅適于檢測支原體,亦可用于檢測真菌和細菌。實驗材料細胞試劑、試劑盒培養液枸櫞酸Carnoy地衣紅冰醋酸酒精儀器、耗材離心機實驗步驟1. ?取材用支持物蓋片培養法或培養液均可;用培養液時,先吸取培養液1 毫升,500~800 轉/分,離心5 分
生化檢測項目支原體檢查法介紹
支原體檢查法介紹: 支原體檢查法是檢查人體否受到支原體的感染,為臨床診斷與治療支原體感染患者提供依據的一種檢查方法。支原體只能粘附在呼吸道或泌尿生殖道的上皮細胞表面的受體上,而不進入組織和血液。支原體檢查法正常值: 酶聯免疫法:為陰性。支原體檢查法臨床意義: 臨床意義 陽性,見于支原體感染,可
支原體常用檢測方法
支原體這種微小的微生物(直徑0.2-0.8 μm),是細胞培養中令人頭疼的大問題。支原體污染可能來自培養基、血清或實驗操作者,會影響細胞生長率、細胞形態、基因表達、細胞代謝和細胞活力。支原體感染不易察覺,因此對培養細胞定期進行支原體檢測就非常重要。 污染實驗室培養細胞的支原體
支原體污染及檢測
(1)支原體污染在細胞培養中最常見、不易被查覺,但支原體污染可顯著影響細胞功能干擾實驗結果。支原體是介于細菌和病毒之間的目前所知能獨立生活的最小微生物,它無細胞壁,形態呈高度多形性,最小直徑0.2um,可通過濾器。?目前通過對國內100余株/系細胞的檢測,形勢不容樂觀。污染率達30%?~?60%?。
ELISAIgM檢測和被動凝集法檢測肺炎支原體抗體的比較
一、肺炎支原體感染的特點肺炎支原體(MP)是一種常見的非典型肺炎的病原體,經飛沫和直接接觸傳播,臨床多表現為呼吸道感染綜合征,起病可急可緩,以發熱和咳嗽為主要表現。中高度發熱多見,也可低熱或無熱。MP對大環內酯類抗生素敏感, 但對常規治療肺炎的藥物耐受。早診斷、早治療有利于避免濫用抗生素, 縮短病程
支原體的掃描電鏡檢測
1、原理利用電子顯微鏡的超級放大功能,可直接觀察培養細胞中支原體污染情況。2、操怍方法①細胞傳代至貼有蓋玻片的平皿中;②培養24h取出;③PSB洗滌;④2.5%戊二醛/ PSB固定15min,PSB洗滌;⑤1%鋨酸固定30min,PSB洗滌;⑥乙酸異戊酯脫水;⑦冰點干燥;⑧噴金;⑨掃描電鏡觀察,照相
細胞支原體污染的PCR檢測
支原體菌株來源:M.Arginini ATCC23838 精氨酸支原體M.FermentaneATCC19989 發酵支原體M.SalivariumATCC23064唾液支原體M.HominisATCC23114人型支原體M.OraleATCC23714口腔支原體M.HyorhinisATCC290
細胞支原體污染的PCR檢測
支原體菌株來源:???????M.Arginini?ATCC23838?精氨酸支原體???????M.FermentaneATCC19989發酵支原體???????M.SalivariumATCC23064唾液支原體???????M.HominisATCC23114人型支原體???????M.Ora
支原體培養實驗——支原體固體培養基接種法
支原體(mycoplasma):又稱霉形體,為目前發現的最小的最簡單的原核生物。支原體細胞中唯一可見的細胞器是核糖體(支原體是原核細胞,原核細胞的細胞器只有核糖體)。實驗材料肺炎支原體試劑、試劑盒糖酵解培養基基礎培養基牛血清酵母浸液酚紅醋酸鉈青霉素儀器、耗材培養皿燒杯玻璃棒天平移液管離心機棉花拭子實
肺炎支原體lgM檢測
實驗方法原理肺炎支原體快速檢測卡可檢測血清中的肺炎支原體lgM抗體。患者的血清樣品分別加入兩個測試孔內,當樣品沿膜擴散時,分別加入3滴抗人lgM堿性磷酸酶復合物、3滴洗液和2滴底物,5分鐘后觀察結果。質控孔為質量控制,固定有人lgM,測試孔固定有肺炎支原體抗原。陽性反應結果為藍色,陰性結果為無色。實
肺炎支原體lgM檢測
【原理】?肺炎支原體快速檢測卡可檢測血清中的肺炎支原體lgM抗體。患者的血清樣品分別加入兩個測試孔內,當樣品沿膜擴散時,分別加入3滴抗人lgM堿性磷酸酶復合物、3滴洗液和2滴底物,5分鐘后觀察結果。質控孔為質量控制,固定有人lgM,測試孔固定有肺炎支原體抗原。陽性反應結果為藍色,陰性結果為無色。【材
微生物學技術:PCR法檢測支原體
PCR法是20世紀80年代中期建立起來的一種體外DNA擴增技術,其基本原理是酶促DNA合成反應,即在DNA模板、引物和脫氧核糖核酸存在下,經DNA聚合酶的作用,使DNA 鏈擴增延伸。該方法具有靈敏度高、特異性強、快速的特點,但其對實驗環境的要求嚴格,實驗成本較高,有時還有假陽性的現象出現。1、儀
支原體培養實驗——支原體半固體培養基接種法
實驗方法原理一、標本采集?支原體常侵及人和動物的粘膜表面,一般可用棉花拭子涂抹取樣后放入2~3 ml支原體液體培養基的小管中,或取其分泌液,若標本是組織塊,可在滅菌乳缽或玻璃勻漿后接種,取樣后應盡快接種培養。?二、分離培養?混種法:在制備半固體培養基時,培養基加熱溶化,溫度降至50℃時,添加動物血清
細胞凋亡檢測實驗——形態學檢測法
細胞凋亡檢測可應用于:(1)腫瘤細胞和組織在內的不同種類病理標本研究;(2)臨床診療,新藥研制、生物制品開發、腫瘤放化療、以及從促凋亡角度探索腫瘤的基因治療;(3)對相關疾病的早期發現、放化療的療效評價具有舉足輕重的地位。實驗方法原理根據凋亡細胞固有的形態特征,使用合適的顯微鏡檢測凋亡細胞形態變化。
細胞支原體污染的熒光檢測方法
DNA熒光染色法:1.原理:利用熒光染劑(bisbenzimide, Hoechst 33258)偵測支原體污染。此染劑會結合到DNA之Adenosine-Thymidine (A-T) rich區域,因為支原體之DNA中A-T含量占多數(55~80%),所以可將其染色而偵測。被支原體污染之細胞經染
支原體檢測的臨床意義
檢查人體否受到支原體的感染是為臨床診斷與治療支原體感染患者提供依據的一種檢查方法。診斷支原體感染必需經過實驗室檢查,不能僅僅根據癥狀就作出診斷。 陽性,見于支原體感染。肺炎支原體是呼吸道感染、肺炎的主要原因。解脲支原體、人型支原體則引起泌尿生殖道感染。
肺炎支原體及其實驗室檢測方法概述
一、肺炎支原體簡介早在1938年,Reimann報道了七名罹患肺炎的患者,其臨床表現不同于一般的細菌性肺炎,但卻有著類似的臨床表現與病程,于是將這種不明原因的肺炎稱之為原發性非典型肺炎,并沿用至今。1944年,Eaton等從一名患原發性非典型肺炎患者的痰液中分離出一種病原體,可引起棉鼠和地鼠肺炎,因