人腫瘤抗原可以:(1)用于腫瘤診斷;(2)免疫治療。實驗方法原理 本實驗用Dynabeads protein A 進行免疫復合物的純化。Dynabeads A 蛋白 (Dynabeads Protein A) 在免疫沉淀中有以下作用:(1)將方案時間減少到 30 分鐘。(2)顯著降低非特異性結合造成的背景(3)保持蛋白質復合物的完整。對珍貴的蛋白質沒有物理壓力。實驗材料腫瘤細胞試劑、試劑盒PBS生理鹽水裂解液蛋白酶抑制劑儀器、耗材培養瓶細胞刮棒離心管低溫離心機-80℃冰箱探針型超聲波恒溫水浴鍋實驗步驟一、 裂解細胞1. 方向刮取細胞。將細胞懸液轉移到離心管,離心取沉淀,-80℃ 保存。(收集細胞要迅速,低溫下進行,以減弱蛋白酶的作用)2. 裂解細胞。采用RIPA 裂解體系,使用前40℃ 預冷,按107 個細胞加入1.0 ml 裂解液,吹打混勻,加入適量的蛋白酶抑制劑(如cocktail......閱讀全文
人腫瘤抗原可以:(1)用于腫瘤診斷;(2)免疫治療。實驗方法原理 本實驗用Dynabeads protein A 進行免疫復合物的純化。Dynabeads A 蛋白 (Dynabeads Protein A) 在免疫沉淀中有以下作用:(1)將方案時間減少到 30 分鐘。(2)顯著降低非特異
實驗材料 腫瘤細胞試劑、試劑盒 PBS生理鹽水裂解液蛋白酶抑制劑儀器、耗材 培養瓶細胞刮棒離心管低溫離心機-80℃冰箱探針型超聲波恒溫水浴鍋實驗步驟 一、 裂解細胞1. 方向刮取細胞。將細胞懸液轉移到離心管,離心取沉淀,-80℃ 保存。(收集細胞要迅速,低溫下進行,以減弱蛋白酶的作用)2
實驗方法原理使用強大的晚期基因啟動子表達的重組蛋白可以用放射性氨基酸標記,再用聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測。當使用早期或晚期基因啟動子時,利用標記蛋白免疫沉淀能提高靈敏性和特異性。試劑、試劑盒磷酸緩沖液(PBS)細胞裂解液[35S]蛋氨酸或[35S]半胱氨酸儀器、耗材完全 MEM-5 培養基(含和不含蛋氨
實驗方法原理通過免疫沉淀,用蛋白質特異性抗體能夠定量分離目的蛋白。免疫沉淀法由三個步驟組成。首先將特異性抗體加入細胞提取物,第二步加入經化學固定的金黃色葡萄球菌,以確保形成大量沉淀。這些細菌通過蛋白質 A 和抗體形成復合物,蛋白質 A 與免疫球蛋白的 Fe 部分有高度的親和性。或者說,純化的蛋白質
免疫沉淀法 實驗方法原理 通過免疫沉淀,用蛋白質特異性抗體能夠定量分離目的蛋白。免疫沉淀法由三個步
實驗方法原理 通過免疫沉淀,用蛋白質特異性抗體能夠定量分離目的蛋白。免疫沉淀法由三個步驟組成。首先將特異性抗體加入細胞提取物,第二步加入經化學固定的金黃色葡萄球菌,以確保形成大量沉淀。這些細菌通過蛋白質 A 和抗體形成復合物,蛋白質 A 與免疫球蛋白的 Fe 部分有高度的親和性。或者說,純化的蛋
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒SDS儀器、耗材離心機實驗步驟1. 按基本方案進行,但以下說明的操作步驟已經修改:(2b)按所需選用步驟4b所提供的其中之一備擇物(①,②,③)預澄清放射性抗原溶液。(4b)加入1 μl 抗原特異性抗血清,或3 μg 抗原特異性單抗,或抗質特異性雜交瘤培養上 清
染色質免疫沉淀法(Chromatin immunoprecitation,ChIP)是研究體內DNA與蛋白質相互作用的重要工具。它可以靈敏地檢測目標蛋白與特異DNA片段的結合情況,還可以用來研究組蛋白與基因表達的關系。核小體組蛋白可以發生多種翻譯后的共價修飾,如乙酰化、甲基化、磷酸化、泛素化等,這些
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒SDS儀器、耗材離心機搖床實驗步驟1. 按基本方案進行,但以下說明的操作步驟已經修改: (2a)按每毫升加入2 μl 正常血清的量對放射性標記抗原進行預澄清處理,加入適量的抗血清,于4℃放置12~18 h, 111 000 g 離心10 min,保留上
基本方案 制備抗體Sepharose 偶聯物 抗Ig血清免疫沉淀放射性標記抗原 免疫沉淀放射性標記抗原