多聚酶鏈式反應PCR
多聚酶鏈式反應PCR ：(1)PCR原理：在模板DNA、引物和4種脫氧單核苷酸存在的條件下依賴于耐高溫的DNA聚合酶的酶促合成反應。以欲擴增的DNA做為模板，以和模板正鏈和負鏈末端互補的兩種寡聚核苷酸做為引物，經過模板DNA變性、模板引物復性結合、并在DNA聚合酶作用下發生引物鏈延伸反應來合成新的模板DNA。模板DNA變性、引物結合(退火)、引物延伸合成DNA這三步構成一個PCR循環。每一循環的DNA產物經變性又成為下一個循環的模板DNA。這樣，目的的DNA的數量將以2n的形式累積，在2小時內可擴增30(n)個循環，DNA量達原來的上百萬倍；(2)PCR過程：1. 模板DNA的變性：模板DNA經加熱至95℃左右一定時間后，DNA雙鏈被解離為單鏈并游離于溶液中的過程；2. 模板DNA與引物的退火(復性)：人工合成的一對引物在適合的溫度下(通常50-65℃)分別與模板DNA需要擴增區域的兩翼進行準確配對結合的過程；3. ......閱讀全文
定量RTPCR－（Quantitative－RTPCR）
Application:?Quantitative RT-PCR?is used to quantify mRNA in both relative and absolute terms. It can be applied for the quantification of mRNA expres
熒光PCR/實時定量PCR技術應用簡介
一．熒光PCR原理1．熒光共振能量傳遞?(FRET)某熒光標記基團在激發光刺激下生成某波長的發射光，當另一屏蔽基團與其距離合適時，原發射光將會被屏蔽基團所吸收，并轉化為其他波長的發射光或熱能，稱之為FRET。2．熒光化學：熒光定量PCR所使用的熒光化學可分為兩種：熒光探針和熒光染料。PCR擴增時在加
Single－Cell－PCR－單細胞PCR實驗技術
Single Cell PCR(Protocol provided by Carolyn Troeger)Cell picking c Axiovert 100/Zeiss, extended glass capillary/Drummond, Broomall and a micromanipul
PCR技術（二）：PCR反應模板的制備
PCR反應的關鍵因素主要有引物的選擇與設計，酶的質量.模板的制備，在前二者都穩定可行的情況下，PCR模板的制備尤為重要.模板處理方法的選擇及操作人員的基 本技能，決定分離模板核酸(DNA或RNA)的質和量及PCR的成敗.而提高模板核酸質量的 關鍵是除去雜質(蛋白質、酶、脂肪等).除去抑制Taq DN
關于溫度梯度PCR和降落PCR
關于溫度梯度PCR和降落PCR的區別：?溫度梯度PCR是指在退火溫度不太明確時，為了找到zui優退火溫度，在一臺PCR儀上同時做多管PCR，每一管放在儀器內不同列（有的是不同行）上，分別進行PCR（如50℃~60℃可以分6管，分別為50，52，54，56，58，60度），zui后看看哪個溫度的效果z
進口PCR儀可提高PCR科研效率
進口PCR儀是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內InVitro的大量合成，基本上它是利用DNA聚合酶進行專一性的連鎖復制。可以將一段基因復制為原來的一百億至一千億倍。根據DNA擴增的目的和檢測的標準，可以將PCR基因擴增儀分為實時熒光定量PCR基因擴增儀，梯度PCR基因擴增儀，普通PCR基
免疫PCR(ImmunoPCR)概念和基礎
（一） 免疫PCR技術的概念免疫PCR是一種抗原檢測系統，將一段已知序列的DNA片段標記到抗原抗體復合物上，再用PCR方法將這段DNA擴增，然后用常規方法檢測PCR產物。免疫PCR集PCR的高靈敏度與抗體和抗原反應的特異性于一體。其突出的特點是指數級的擴增效率帶來了極高的敏感度，能檢出濃度低至2ｎｇ
直接原位PCR（In－situ－PCR）操作方法
原位PCR是原位雜交細胞定位和PCR的高靈敏度相結合的技術，使得靶基因檢測有了極大的改進。此技術是在細胞（爬片、甩片或涂片）或組織（石蠟、冰凍切片）上直接對靶基因片段進行擴增，通過摻入標記基團直接顯色或結合原位雜交進行檢測的方法。1．組織切片和細胞樣品的制備【試劑與配置】10%福爾馬林二甲苯PBS【
間接原位PCR（原位雜交PCR）實驗
實驗材料 組織或細胞樣品試劑、試劑盒 SSC硫酸葡聚糖甲酰胺脫脂奶粉Denhardt’s 液SDS變性的鮭魚精DNARnaseDTT乙醇儀器、耗材 玻片石蠟膜橡皮泥濕盒實驗步驟 一、預雜交?1. ? 試劑與配制?2×SSC?50%去離子甲酰胺：用4×SSC配制（v/v）?預雜交液：2×SSC，5%硫
PCR實驗技術指南之PCR反應參數
1. 變性：在*輪循環前，在94℃下變性5-10min 非常重要，它可使模板DNA 完全解鏈，然后加入Taq DNA聚合酶(hot start)，這樣可減少聚合酶在低溫下仍有活性從而延伸非特異性配對的引物與模板復合物所造成的錯誤。變性不完全，往往使PCR 失敗，因為未變性完全的DNA 雙鏈會很快復性
降落PCR（Touchdown－PCR）技術的的優點
綜合比較普通PCR技術和最大耐受量聚合酶鏈反應，認為前者程序簡單，省時，一般的PCR擴增儀都可完成，但缺點是退火溫度不適當時容易出現假陽性;而最大耐受量聚合酶鏈反應雖然程序復雜，需要擴增儀有較大的內存，但能非常有效地降低或避免假陽性，且不在理想的工作條件（比如最佳鎂離子濃度）下也可擴增出產物。?這就
PCR技術（十三）：PCR用于進化分析
進化遺傳學具有兩個并列的研究方向：系統發育的重建和種群分析。自1962年， Zuckerkandl和Pauling提出蛋白質序列和基因序列的比較可以象分子種一樣用于標志 現存物種分化的時間以來，各種生化方法被用于系統發育的研究。在最初二十年內， 同功酶的電泳分析、免疫學比較和蛋白質序列分析被廣泛地應
關于溫度梯度PCR和降落PCR
關于溫度梯度PCR和降落PCR的區別： ?溫度梯度PCR是指在退火溫度不太明確時，為了找到最優退火溫度，在一臺PCR儀上同時做多管PCR，每一管放在儀器內不同列（有的是不同行）上，分別進行PCR（如50℃~60℃可以分6管，分別為50，52，54，56，58，60度），最后看看哪個溫度的效果最好。總
PCR實驗技術指南之PCR反應參數
1. 變性：在*輪循環前，在94℃下變性5-10min 非常重要，它可使模板DNA 完全解鏈，然后加入Taq DNA聚合酶(hot start)，這樣可減少聚合酶在低溫下仍有活性從而延伸非特異性配對的引物與模板復合物所造成的錯誤。變性不完全，往往使PCR 失敗，因為未變性完全的DNA 雙鏈會很快復性
實時定量PCR（Realtime－quantitative－PCR）
mRNA表達的研究 微小殘留病變的檢測 腫瘤耐藥基因表達的研究 病毒感染的定量監測Vs普通PCR，RT-PCR的優勢 采用封閉的檢測模式，因此擴增產物導致污染的可能性比普通PCR要小得多 。 擴增產物的檢測在PCR擴增過程中同時進行，并且數據的采集、分析全部由 儀器 自動完成，因此整個檢測所 需的時
什么是反向－PCR？反向－PCR的特點
常規 PCR 是擴增兩引物之間的 DNA 片段,反向 PCR(reverse PCR)是用引物來擴增兩引物以外的 DNA 片段。一般先用限制性內切酶酶解 DNA(目的基因中不存在該酶的酶切位點,且片段應短于2～3kb),然后用連接酶使帶有黏性末端的靶片段自身環化,最后用一對反向引物進行 PCR,得到
TAILPCR（thermal－asymmetric－interlaced－PCR)簡介
在分子生物學研究中,基因克隆和分子雜交的探針制備等操作常需分離與已知DNA序列鄰近的未知序列，TAIL-PCR又叫熱不對稱交錯PCR，能夠較好地解決上述難題。該技術通過3個嵌套的特異性引物分別和簡并引物組合進行連續的PCR循環，利用不同的退火溫度選擇性地擴增目標片段，所獲得的片段可以直接用做探針標記
PEQLAB推出最新PCR技術與PCR儀
PEQLAB是一家專注于分子生物學領域試劑、儀器及耗材研發、生產及銷售的德國公司。旗下的全資子公司Clemens 成立于1989年，是德國三大PCR儀器制造商之一，擁有近20年的PCR儀研發及生產經驗。其新近研發的peqSTAR是集高通量，快速，多功能，觸摸屏設計于一體的高端PCR儀，引領21s
反向PCR(reverse－PCR)原理、程序和局限
反向PCR(reverse PCR)是用反向的互補引物來擴增兩引物以外的未知序列的片段，而常規PCR擴增的是已知序列的兩引物之間DNA片段.實驗時選擇已知序列內部沒有切點的限制性內切酶對該段DNA進行酶切，然后用連接酶使帶有粘性末端的靶序列環化連接，再用一對反向的引物進行PCR，其擴增產物將含有
新型PCR分析方法毛細管PCR技術
新型PCR分析方法毛細管PCR技術?常規PCR反應采用導熱性較差的塑料管作為反應容器，對于100~1樣品，樣品溫度要比槽板溫度滯后2030s，加上槽板升降溫度較慢（1C／s），因此30個循環反應通常需要2～6h，循環時間多浪費在常規PCR反應采用導熱性較差的塑料管作為反應容器，對于100~1樣品，樣
如何做實時熒光定量－PCR－(realtime－PCR)
標簽： 實時 熒光定量 PCR realtime PCR 本生生物 所謂實時熒光定量 PCR 技術，是指在 PCR 反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監測整個 PCR 進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。 原理及材料： 實驗材料：細胞樣品 試劑、
實時熒光定量PCR與普通PCR的區別
二者結果相同。都能說明生物體外的特殊DNA復制的整個過程的擴增效率和溶解溫度情況。區別：1、二者系統組成不同熒光定量PCR儀比普通的PCR儀多了熒光信號采集系統和計算機分析處理系統。2、二者原理不同熒光定量PCR實時監測與DNA結合的熒光染料激發的熒光，普通OCR通過檢測插入DNA中核算染料的量來測
PCR儀RACE的PCR結果有雜帶
RACE PCR雜帶或非特異性PCR條帶可能是由于以下原因： *GSP與其他cDNA的非特異性結合會導致在擴增目的產物時得到無關產物。 *GeneRacer引物和cDNA的非特異性結合會導致產生一端帶有GeneRacer引物序列的PCR產物。 *RNA降解。 *PCR管或試劑污染。 注
新型PCR分析方法毛細管PCR技術
常規PCR反應采用導熱性較差的塑料管作為反應容器，對于100~1樣品，樣品溫度要比槽板溫度滯后20—30s，加上槽板升降溫度較慢(1’C／s)，因此30個循環反應通常需要2～6h，循環時間多浪費在加熱和冷卻樣品過程中，不能滿足臨床快速診斷的需要。毛細管PCR由于采用導熱性遠強于塑料管的毛細管作為反應
RainDrop數字PCR系統實現10重PCR分析
【摘要】美國RainDance Technologies公司擁有ZL的RainStorm即皮升級微流體液滴制備技術，基于此核心技術RainDance推出了新型RainDrop 數字PCR系統，這一新型系統除具有超高檢測靈敏度和精確絕對定量能力外，更擁有無與倫比的多重分析能力，可實現10重PCR分
PCR技術服務PCR的實用技巧
增加PCR的特異性：1. primers design這是zui重要的一步。理想的，只同目的序列兩側的單一序列而非其它序列退火的primer要符合下面的 一些條件1) 足夠長,18-24bp,以保證特異性.當然不是說越長越好,太長的primer同樣會降低特異性,并且降低產量2) GC% 40%~60
反向pcr和反式pcr一樣么
反式PCR,或者稱反轉錄PCR(Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)、逆轉錄PCR,是聚合酶鏈式反應(PCR)的一種廣泛應用的變形.在RT-PCR中,一條RNA鏈被逆轉錄成為互補DNA,再以此為模板通過PCR進行DNA擴增.P
PCR新手指南：PCR儀的故障分析
PCR儀是一種在實驗室使用頻率及使用時間非常高的儀器，因此故障率也是比較高的。PCR儀的故障主要有以下幾類：1、制冷半導體故障2、溫度傳感器故障3、控制板故障4、電源板故障5、熱蓋故障6、軟件故障7、其他故障下面就這幾類問題做簡單分析。1、制冷半導體故障制冷半導體故障率與制冷半導體的質量、溫度變化次
談關于溫度梯度PCR和降落PCR
??關于溫度梯度PCR和降落PCR的區別：??溫度梯度PCR是指在退火溫度不太明確時，為了找到優退火溫度，在一臺PCR儀上同時做多管PCR，每一管放在儀器內不同列（有的是不同行）上，分別進行PCR（如50℃~60℃可以分6管，分別為50，52，54，56，58，60度），最后看看哪個溫度的效果好。總
快速了解熒光定量PCR與數字PCR區別
提起 PCR，在生物及其相關行業內可謂如雷貫耳，無人不知無人不曉，其影響之深，應用之廣可見一斑。 1985 年，美國 PE-Cetus 公司的 Mullis 等人發明了聚合酶鏈反應（PCR），實現了在試管中模擬細胞內的 DNA 復制。然而，采用 E-coli DNA 聚合酶進行 PCR，由