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    層析新知:層析技術進步發展期

    上世紀60、70年代是色譜/層析技術快速發展的時代,首先是層析介質有了飛速的發展,各種人工合成的介質出現,如硅膠、聚苯乙烯二乙烯基樹脂、瓊脂糖、葡聚糖、聚丙烯酰胺等樹脂或凝膠的出現,極大地拓展了層析技術的應用領域和范圍,基于不同介質的層析方法也如雨后春筍般不斷涌現。如Bio-Rad公司于上世紀50年初推出的分析級離子交換樹脂AG系列,廣泛用于各種分子物質的分離純化,包括無機離子、有機酸、核酸以及糖類等。值得一提的是,上世紀4、50年代正是DNA、RNA研究如火如 荼的時期,而Bio-Rad推出的AG系列樹脂在核酸純化方面具有極其出色表現,受到眾多研究人員的歡迎與好評。 Bio-Rad AG系列樹脂 此外,因為馬丁(Martin)和辛格(Synge)的鉆研與暢想,他們的預言分別在1952年及20世紀60年代被人們所應證。而馬丁(Martin)和辛格(Synge)兩人也于1952年被授予諾貝爾化學獎。 ......閱讀全文

    層析技術:生物化學實驗常用技術(1)

    層析技術是近代生物化學最常用的分離技術之一。它是利用混合物中各組分的理化性質(吸附力、分子形狀和大小、分子極性、分子親和力、分配系數等)的差異,在物質經過兩相中,不斷地進行交換、分配等過程。任何層析都具有兩個相,即固定相和流動相。固定相固定不動,流動相對固定相作單相的相對運動,從而推動樣品中各組分通

    細菌細胞壁糖的薄層層析(thin layer chromatography,TLC)(1)

    一、實驗目的1.熟悉薄層層析的操作步驟。2.掌握薄層層析法分析細菌細胞壁糖的原理和方法。二、實驗原理簿層層析是一種微量而快速的層析方法。該方法是把吸附劑或支持劑(例如硅膠或硅藻土)涂在玻璃板上成為一簿層,將要分析的樣品滴加到薄層上,然后用合適的溶劑進行展開,使樣品中各個成分分離,最后進行定性鑒定和定

    離子交換層析法蛋白質的純化實驗

    離子交換層析法             實驗方法原理 可進行離子交換的蛋白質在實驗條件下必須有單一電荷。溶液中單一電荷的蛋

    蛋白質分離和分析

    基 本 方 案 可 溶 性 或 膜 結 合 抗 原 的 分 離材 料抗 體(Ab)-Sepharose (單兀 12. 2)活 化 的(對照)Sepharose填料,用于制 備 A b -Sepharose填 料(單 元 12. 2),但去除了抗體或偶聯時用無關抗體替代細胞或勻漿的組織T S A 溶

    生化實驗講義(理論部分)——層析技術(三)

    3.1 層析技術概述3.1.1 引言層析法又稱色層分析法或色譜法(Chromatography),它是在1903-1906年由俄國植物學家M. Tswett首先系統提出來的。他將葉綠素的石油醚溶液通過CaCO3管柱,并繼續以石油醚淋洗,由于CaCO3對葉綠素中各種色素的吸附能力不同,色素被逐漸分

    植物傷流液中氨基酸成分分析實驗

    實驗方法原理紙譜分析亦稱濾紙層析,是將混合的溶液在濾紙上用層析溶劑加以分離的鑒定或定量的技術。層析溶劑由有機溶劑和水組成,其中水分子被濾紙的纖維素所吸附,成為固定相,而有機溶劑則成為推動相。當推動相沿濾紙移動時,樣品中各種溶質因在二相中的分配系數(即在二相中溶解度的比例)不同而造成親脂性較強的溶質移

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    凝膠層析法脫鹽和分離蛋白質(附凝膠過濾法原理及基本操作)-3(2)裝柱將層析劑裝入柱中進行層析的方法稱柱層析法。作層析用的柱子稱層析柱。層析柱有玻璃和透明塑料的兩種。柱子的一端為進口,另一端為出口,出口端底部有燒結玻璃砂板或尼龍布,能阻止層析劑流出,溶劑則可流過。如果沒有市售的層析柱,可以選用粗細均

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    實驗方法原理 紙譜分析亦稱濾紙層析,是將混合的溶液在濾紙上用層析溶劑加以分離的鑒定或定量的技術。層析溶劑由有機溶劑和水組成,其中水分子被濾紙的纖維素所吸附,成為固定相,而有機溶劑則成為推動相。當推動相沿濾紙移動時,樣品中各種溶質因在二相中的分配系數(即在二相中溶解度的比例)不同而造成親脂性

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    離子交換層析法蛋白質的純化實驗

    實驗方法原理 可進行離子交換的蛋白質在實驗條件下必須有單一電荷。溶液中單一電荷的蛋白質可被離子交換樹脂上的小離子置換(指與蛋白質末端離子的交換);固定在樹脂上。通過提高溶液中相反離子濃度或降低蛋白質所帶電荷數等方法可將蛋白質從樹脂上洗脫下來。利用此法,可根據不同蛋白質電荷性質不同而將其分離開來。若已

    多羥基反應單克隆抗體的鑒定、生產和使用

    所有形式的親和層析法都需要兩個組分間形成特異性相互作用,通過這種作用可以純化其中一種組分。免疫親和層析即利用抗原和抗體的特異性相互作用,是遵循親和層析原理的一個分類 [綜述見 Subramanian(2002)]。事實上,免疫親和層析是免疫沉淀程序規模放大的拓展應用,不同的部分在于, 層析后需要回收

    層析技術(色譜法,Chromatography)概念、分類和操作(1)

    層析技術概述引言層析法又稱色層分析法或色譜法(Chromatography),它是在 1903~1906年由俄國植物學家M. Tswett首先提出來的。他將葉綠素的石油醚溶液通過CaCO3管柱,并繼續以石油醚淋洗,由于CaCO3對葉綠素中各種色素的吸附能力不同,色素被逐漸分離,在管柱中出現了不同

    層析技術的應用(一)

    (一)層析技術的原理層析法是目前廣泛應用的一種分離技術。本世紀初俄國植物學家M.Tswett發現并使用這一技術證明了植物的葉子中不僅有葉綠素還含有其它色素。現在層析法已成為生物化學、分子生物學及其它學科領域有效的分離分析工具之一。層析法是利用不同物質理化性質的差異而建立起來的技術。所有的層析系統都由

    重組G蛋白偶聯受體的純化實驗

    純化受體從概念上可以分成兩步: 第一步用合適的去污劑將受體從膜中提取出來 (增溶); 第二步使用如常規的親和標簽、與該受體特異結合的配體層析柱、分子排阻色譜和其他方法純化受體。最重要的是,必須注意選擇實驗條件以保持膜蛋白在整個純化過程中處于活性狀態。這一點怎么強調也不過分,因為很多 GPCR—旦被去

    氨基酸的紙層析(paper chrmatography)

    一、 實驗目的1.了解并掌握氨基酸紙層析的原理和方法。2.學習紙層析法的操作技術,分析未知樣品氨基酸的成分。二、 實驗原理用濾紙為支持物進行層析的方法,稱為紙層析法,它是分配層析法的一種。紙層析所用的展層溶劑大多是由水飽和的有機溶劑組成。濾紙纖維的—OH 基的親水性基團,可吸附有機溶劑中的水作為

    重組G蛋白偶聯受體的純化實驗

    實驗步驟 一、引言 天然的整合膜蛋白的量并不充足。因此對其的結構測定和功能分析需要:①重組膜蛋白的生產系統;②能分離得到有活性的膜蛋白(而不是沒有功能、折疊錯誤的膜蛋白)的純化策略。表達并純化原核和真核的膜蛋白在文獻中都有報道。讀者

    疏水作用層析

    實驗概要通過實驗了解疏水作用層析的原理與方法。實驗原理疏水作用層析(Hydrophobic  Interaction  Chromatography,HIC)是根據分子表面疏水性差別來分離蛋白質和多肽等生物大分子的一種較為常用的方法。蛋白質和多肽等生物大分子的表面常常暴露著一些疏

    高效的純化工具——膜層析

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    層析技術的應用(四)

      (三)高效液相層析法      高效液相層析法(HPLC)是近二十年來發展起來的一項新穎快速的分離技術。它是在經典液相層析法基礎上,引進了氣相層析的理論具有氣相層析的全部優點。由于HPLC分離能力強、測定靈敏度高,可在室溫下進行,應用范圍極廣,無論是極性還是非極性,

    方案5 利用 Nano-LC 耦聯 MS/MS 分析復雜蛋白質混合物實驗

    實驗材料蛋白分部收集物試劑、試劑盒乙腈(HPLC級)乙 腈(5%) 5%甲酸HPLC 溶液甲醇(HPLC級)儀器、耗材酒精燈二元泵或四元泵C18反相層析填料C18固相抽提移液吸頭陶瓷劃片熔融石英毛細管金線有刻度的玻璃毛細管帶壓力計的氦氣罐高效液相色譜系統激光拉針器Nano-LC 離子源PEEK 微型

    高效液相層析法

    高效液相層析法(HPLC)是近二十年來發展起來的一項新穎快速的分離技術。它是在經典液相層析法基礎上,引進了氣相層析的理論具有氣相層析的全部優點。由于HPLC分離能力強、測定靈敏度高,可在室溫下進行,應用范圍極廣,無論是極性還是非極性,小分子還是大分子,熱穩定還是不穩定的化合物均可用此法測定。對蛋白質

    干貨貼之「載量和上樣量」

    在做層析實驗的時候可能時常會遇到一個問題:一次實驗可以上多少樣品呢?多也不是少也不是,上樣多了會造成一部分樣品損失或者達不到預期的分離效果,上樣少了無法充分使用層析柱還要增加重復實驗或者使用更大層析柱,真是件糾結的事情。我們今天要來給大家介紹的就是不同的層析柱應該如何確定上樣量。 層析柱上樣量由

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    親和層析(Affinity Chromatography)(1)

    親和層析(Affinity Chromatography)是利用生物分子間專一的親和力而進行分離的一種層析技術。人們很早就認識到蛋白質、酶等生物大分子物質能和某些相對應的分子專一而可逆的結合,可以用于對生物分子的分離純化。但由于技術上的限制,主要是沒有合適的固定配體的方法,所以在實驗中沒有廣泛的

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