一、貼壁細胞蛋白提取A1..將水浴鍋的溫度調至100℃,等水浴鍋達到100℃溫度后,取出需要收樣的細胞的培養皿或者孔板。2.將緩沖液(1Xloading buffer)置于100℃水浴鍋中預熱10min。(loding buffer: 是5Xloding buffer用純水稀釋到1Xlodingbuffer。廠家:碧云天;貨號: P0015L)3.棄去細胞培養基,用PBS洗兩遍。4.取預熱好的緩沖液1X loding加入到去除細胞培養液的細胞中,用細胞刮將細胞掛下收集到EP管。(加入loding buffer的體積建議量,以細胞密度長到70%-80%,6孔板每孔加入120ul;150px皿200ul;250px皿300ul)5.將收集好的細胞液轉移到EP管中,立即放入100℃煮15min。6.B1.倒掉培養液,并將瓶倒扣在吸水紙上使吸水紙吸干培養液(或將瓶直立放置一會兒使殘余培養液流到瓶底然后再用移液器將其吸......閱讀全文
WB檢測之二抗二抗選擇二抗是用一抗免疫動物制備的抗一抗的抗體,選擇范圍較窄,基本是商品化的,在不考慮二抗修飾類型的前提下,二抗的選擇需要遵循以下原則:二抗來源種屬、一抗來源種屬和抗原來源種屬互不相同。例如如果研究對象是人的蛋白X,選擇了鼠抗X一抗,則可選擇兔抗鼠二抗或者羊抗鼠二抗。二抗選擇要考慮的問
蛋白質免疫印跡雜交實驗(Western Blotting)是成熟 mRNA 翻譯指導蛋白質合成量分析檢測手段中最經典和最廣泛為業界認可的一種,也是論文中最常見的數據呈現形式之一。雖然Western Blot實驗原理比較簡單,但是實驗耗時長、步驟繁瑣和實驗結果重復性差,導致剛進實驗室的小伙伴們
蛋白質免疫印跡雜交實驗(Western Blotting)是成熟 mRNA 翻譯指導蛋白質合成量分析檢測手段中最經典和最廣泛為業界認可的一種,也是論文中最常見的數據呈現形式之一。雖然Western Blot實驗原理比較簡單,但是實驗耗時長、步驟繁瑣和實驗結果重復性差,導致剛進實驗室的小伙伴們
蛋白質免疫印跡雜交實驗(Western Blotting)是成熟 mRNA 翻譯指導蛋白質合成量分析檢測手段中最經典和最廣泛為業界認可的一種,也是論文中最常見的數據呈現形式之一。雖然Western Blot實驗原理比較簡單,但是實驗耗時長、步驟繁瑣和實驗結果重復性差,導致剛進實驗室的小伙伴們,實驗做
蛋白質免疫印跡雜交實驗(Western Blotting)是成熟 mRNA 翻譯指導蛋白質合成量分析檢測手段中最經典和最廣泛為業界認可的一種,也是論文中最常見的數據呈現形式之一。雖然Western Blot實驗原理比較簡單,但是實驗耗時長、步驟繁瑣和實驗結果重復性差,導致剛進實驗室的小伙伴們
蛋白質免疫印跡雜交實驗(Western Blotting)是成熟 mRNA 翻譯指導蛋白質合成量分析檢測手段中最經典和最廣泛為業界認可的一種,也是論文中最常見的數據呈現形式之一。雖然Western Blot實驗原理比較簡單,但是實驗耗時長、步驟繁瑣和實驗結果重復性差,導致剛進實驗室的小伙伴們
Western blot(WB)是檢測蛋白質及蛋白質翻譯后修飾的經典方法,可在簡單或復雜的生物樣品中提供有關靶蛋白的半定量或定量數據。WB 步驟復雜,通常包括:蛋白樣本制備→電泳→轉膜→封閉→孵育一抗→孵育二抗→顯影→分析。WB 任何過程出現 Bug 均可影響結果的重復性與靈敏度,因此必須注意將 W
在經典的Western Blot的世界里,蛋白電泳—轉膜—封閉—抗體—顯色這個五步驟環環相扣,構成WB完整過程,就象砌積木一樣,少了前面一步的基礎后面的就砌不上去。但是親愛的朋友,告訴我,你們在一次又一次重復這個貌似簡單又頗為費時的實驗時,有沒有設想過能省略掉其中的某個費時的非必需步驟,更直接更快得
Western免疫印跡(Western Blot)是將蛋白質轉移到膜上,然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白,可用相應抗體作為一抗進行檢測,對新基因的表達產物,可通過融合部分的抗體檢測。一、原理與Southern或Northern雜交方法類似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被
實驗方法原理噬菌體展示技術是將外源基因與噬菌體的表面蛋白基因融合,在融合了外源基因的噬菌體顆粒的表面就會表達相應的外源蛋白,即外源基因編碼的蛋白被展示在噬菌體顆粒的表面。實驗材料載體tRNA抗體寡核苷酸試劑、試劑盒抗生素儲存液BCIP葡萄糖儲存液X-Gal磁珠洗液蛋白酶抑制劑RNase 抑制劑TEN
公司簡介 武漢賽默飛生命科技有限公司成立于2019年,注冊資金100萬元,公司光谷生物產業園。賽默飛生命科技致力于為行業內的客戶提供技術開發、技術咨詢、技術轉讓等服務,秉承著“我們用心 客戶省心”的服務理念打造出一支敢于創新、敢于挑戰的綜合服務團隊。 賽默飛生命科技主營業務:大鼠熱休
Western Blot 現在仍然是檢測和分離蛋白最常用的一種實驗方法,但是要想得到較好的結果并不容易,只有找到合適的實驗條件并進行優化,才能以更少的時間得到更多的結果,達到事半功倍的效果!下面是 R&D Systems 品牌為您推薦的免疫印跡優化步驟和實驗涉及參考數據:一抗濃度對實
凝膠遷移實驗有稱凝膠阻滯實驗或電泳遷移率實驗(EMSA,electrophoretic mobility shift assay),是一種用于蛋白與核算相互作用的技術。最初是用于轉錄因子與啟動子相互作用的驗證性實驗,也可應用與蛋白-DNA、蛋白-RNA互作研究。 一、實驗原理 EMSA主要基于蛋白
想要研究蛋白質,首先要得到高度純化且具有生物活性的目的物質,因此,蛋白樣品的制備是重要前提。蛋白提取的質量和效果對后續的研究分析有重要影響。不同種類的樣本在制備過程中,存在一些差異,要根據樣本特征調整實驗方案和操作細節。基本原則樣品處理盡量簡單,減少蛋白損失;盡量避免蛋白的降解;盡可能提高樣品蛋白的
每一個領域的發展都是基于技術的進步和革新,蛋白質組學亦然。蛋白質的可變性和多樣性等特殊性質導致了蛋白質研究技術遠遠比核酸技術要復雜和困難得多,但正是這些特性參與和影響著整個生命過程。在開始實驗之前,先看看這篇技術簡介吧。一 蛋白質與DNA相互作用在許多的細胞生命活動中,例如DNA復制、mR
根據世界衛生組織發布的數據,心血管疾病一直是人類健康的“第一殺手”,但是相比于各種惡性腫瘤,這個“殺手”在科研領域卻低調很多。究其原因,沒有細胞模型,動物模型并不能完美的模擬心血管疾病發生發展的過程等等,都導致了心血管疾病的基礎科研相對薄弱。但是對于臨床醫生,除去關心機制,我們更應該通過科研去解決臨
19、武漢中幟生物科技股份有限公司(027-59368696) 武漢中幟生物科技股份有限公司是一家專業從事分子生物檢測及臨床醫學診斷新技術新產品研發、生產和銷售為一體的醫療器械類高新技術企業。 公司主打產品多重呼吸道病原體核酸檢測試劑基于自有核心專利技術——T7RNA恒溫擴增和多生物素信號放
以新型生物芯片為代表的自動化智能型醫療技術從腫瘤診療研究走向早期診斷及動態監控等臨床應用,成為精準醫療時代的重要組成。其中,液體活檢是最重要的研究領域之一,在癌癥早篩、預后監測、用藥指導、患者分層等領域均表現出十足的潛力,出現了大批重要臨床結果。 2018年已近尾聲,縱覽一年液體活檢助力精準
3.gga-miR-373 通過與YAP1的3’UTR區結合負調控YAP1的表達,并且過表達gga-miR-375可減弱EMT生信預測揭示YAP1是gga-miR-375的潛在靶基因,進一步的雙熒光素酶報告基因證實了gga-miR-375可通過結合YAP1的3’UTR區抑制YAP1的表達;在體外細胞
在免疫學實驗中,通常使用封閉劑來減少非特異性結合。常用的封閉劑有脫脂奶粉,BSA,血清以及 Fab 片段單鏈二抗等。根據不同的平臺選擇相應的封閉劑。脫脂奶粉作用原理:脫脂奶粉含有多種蛋白,可以封閉未吸附蛋白的固相載體(WB 膜、ELISA 板等)位點,減少抗體與之結合的概率,避免
基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜(matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)是20世紀80年代發展起來的一種新型軟電離有機質譜, 作為一種新興的蛋白質組學檢測技
基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜(matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)是20世紀80年代發
基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜(matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)是20世紀80年代發展起來的一種新型軟電離有機質譜, 作為一種新興的蛋白質組學
人體內的血液循環系統猶如印度的圣河 – 恒河,河水中攜帶的養分滋養著古老的大地;洗滌帶走地上的ㄧ切污穢,人們的一生都在河水中完成。如此的恒河可以想象,河水中充斥著各種物質,有廢物有養分,只要你想都可以從河水中撈取。同樣的我們的循環系統如同恒河;流動的血液如同恒河水,身體所需的ㄧ切由血液運送,身體
公司簡介 武漢賽默飛生命科技有限公司成立于2019年,注冊資金100萬元,公司光谷生物產業園。賽默飛生命科技致力于為行業內的客戶提供技術開發、技術咨詢、技術轉讓等服務,秉承著“我們用心 客戶省心”的服務理念打造出一支敢于創新、敢于挑戰的綜合服務團隊。 賽默飛生命科技主營業務:小鼠主要
一、 概述: 生物芯片這一名詞最早是在80年代初提出的,主要指分子電子器件。美國海軍實驗室研究員Carter 等試圖把有機功能分子或生物活性分子進行組裝,想構建微功能單元,實現信息的獲取、貯存、處理和傳輸等功能。用以研制仿生信息處理系統和生物
實驗概要 生物芯片這一名詞最早是在80年代初提出的,主要指分子電子器件。美國海軍實驗室研究員Carter 等試圖把有機功能分子或生物活性分子進行組裝,想構建微功能單元,實現信息的獲取、貯存、處理和傳輸等功能。用以研制仿生信
開始細胞傳代前,仔細檢查細胞傳代所需的儀器和試劑是否齊全。 細胞與試劑方面: 1、細胞(單層細胞,鏡檢適合) 2、培養液(MEM-0.2%LH 培養液或MEM 培養液或199 等適合細胞有要求的培養液) 3、滅活小牛血清、慶大霉素溶液(1 萬單位) 4、7.5%NaHC03 溶液 5、0.25%胰
免疫學實驗中,嘗嘗會出現高背景值,影響實驗結果的檢測。這是因為在使用相關免疫學試劑時,蛋白與未吸附的固體載相結合,發生非特異性結合造成的。免疫學實驗中常通過封閉試劑來封閉這樣的固相載體部位,以減少或消除非特異性結合背景的影響。常見的封閉劑包括脫脂奶粉、牛血清白蛋白BSA、動物血清和Fab片段單鏈二抗
實驗概要免疫印跡是利用聚丙烯酰胺凝膠電泳來檢測樣品或提取物中某種特定蛋白的方法。聚丙烯酰胺凝膠緊貼著膜放置,在電流的作用下蛋白質從凝膠遷移到膜上并且被固定,常用的膜是硝酸纖維素或 PVDF(聚偏乙烯氟化物)。膜是凝膠蛋白質的復制品,然后可以與抗體結合后進行染色。實驗步驟1.