cDNA3末端的快速擴增（3’RACE)
實驗方法原理 在用 oligo (dT) 引物構建的 cDNA 文庫中，偶而發生部分 cDNA 克隆缺失了與靶 mRNA 3' 末端互補的序列。這部分序列到底是在 cDNA 合成過程中還是在分子克隆中怎樣缺失和在哪個環節中缺失的尚不清楚。第一鏈 cDNA 的隨機斷裂，在合成第二鏈 cDNA 過程中 DNA 聚合酶不能抵達模板鏈的末端，引導序列內部的 poly (A) 序列或在分子克隆過程中 poly (dA:dT) 序列附近的 3' 序列的缺失等都是可能造成 3' 末端序列缺失的原因。在用隨機六核苷酸引物構建的 cDNA 基因文庫中，也存在部分的 cDNA 克隆缺失了 3' 末端序列，這是因為這種隨機引物能與靶 mRNA 的許多位點復性結合所致。實驗材料 反轉錄酶反轉錄酶緩沖液熱穩定 DNA 聚合酶接頭引物基因特異性反義寡核苷酸引物總 RNA試劑、試劑盒 擴增緩沖液氯仿dNTP......閱讀全文
cDNA 3'末端的快速擴增（3’-RACE)
在用 oligo (dT) 引物構建的 cDNA 文庫中，偶而發生部分 cDNA 克隆缺失了與靶 mRNA 3' 末端互補的序列。這部分序列到底是在 cDNA 合成過程中還是在分子克隆中怎樣缺失和在哪個環節中缺失的尚不清楚。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂等譯。實驗方法原理在用 o
cDNA 3'末端的快速擴增（3’-RACE)
實驗方法原理 在用 oligo (dT) 引物構建的 cDNA 文庫中，偶而發生部分 cDNA 克隆缺失了與靶 mRNA 3' 末端互補的序列。這部分序列到底是在 cDNA 合成過程中還是在分子克隆中怎樣缺失和在哪個環節中缺失的尚不清楚。第一鏈 cDNA 的隨機斷裂，在合成第二鏈 c
cDNA 3'末端的快速擴增（3’-RACE)
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 在用 oligo (dT) 引物構建的 cDNA 文庫中，偶而發生部分 cDNA 克隆缺失了與靶 mRNA 3' 末端互補的序列。這部分序列到底是在 cDNA 合成過程中還是在分子克隆中怎樣缺失和在哪個環節中缺失的尚
cDNA 5’末端的快速擴增（5’-RACE）
實驗方法原理?在分子克隆中沒有比分離缺乏相應的 mRNA 5' 末端的序列特征結構的 cDNA 克隆更易失敗的了。通常存在于 cDNA 基因文庫中的部分克隆，由于反轉錄酶未能沿全長 mRNA 模板延伸完全，合成的 cDNA 第一條鏈往往 5' 末端不完整。實驗材料?反轉錄酶末端脫氧核
cDNA 5’末端的快速擴增（5’-RACE）
在分子克隆中沒有比分離缺乏相應的 mRNA 5' 末端的序列特征結構的 cDNA 克隆更易失敗的了。通常存在于 cDNA 基因文庫中的部分克隆，由于反轉錄酶未能沿全長 mRNA 模板延伸完全，合成的 cDNA 第一條鏈往往 5' 末端不完整。本實驗來源「分子克隆實驗指南第三版」黃培堂
cDNA 5’末端的快速擴增（5’-RACE）
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 在分子克隆中沒有比分離缺乏相應的 mRNA 5' 末端的序列特征結構的 cDNA 克隆更易失敗的了。通常存在于 cDNA 基因文庫中的部分克隆，由于反轉錄酶未能沿全長 mRNA 模板延伸完全，合成的 cDNA 第一條
用經典 RACE 擴増 3'末端 cDNA 實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 dNTP 溶液 二硫蘇糖醇 TE 反轉錄緩沖液 RNA 酶 H RNasin SuperScriptⅡ逆轉錄酶
用經典 RACE 擴増 3'末端 cDNA 實驗
試劑、試劑盒?dNTP 溶液二硫蘇糖醇TE反轉錄緩沖液RNA 酶 HRNasinSuperScriptⅡ逆轉錄酶poly(A)+RNA 或總 RNAQT 引物Hercules Hot-Start 聚合酶儀器、耗材?水浴或加熱儀熱循環儀實驗步驟?試劑可以從多數大供應商那里買到該過程所需要的材料與合適的
用經典 RACE 擴増 3'末端 cDNA 實驗
試劑、試劑盒dNTP 溶液二硫蘇糖醇TE反轉錄緩沖液RNA 酶 HRNasinSuperScriptⅡ逆轉錄酶poly(A)+RNA 或總 RNAQT 引物Hercules Hot-Start 聚合酶儀器、耗材水浴或加熱儀熱循環儀實驗步驟試劑可以從多數大供應商那里買到該過程所需要的材料與合適的 5X
用經典 RACE 擴增 cDNA 的5’末端實驗
試劑、試劑盒 GSP-RT 引物poly(A)+RNA 或總 RNA反轉錄緩沖液 RNA 酶 HRNasinSuperScriptII 逆轉錄酶dNTP 溶液DTTTECoCl2dATP 溶液脫氧核苷酸末端轉移酶加尾緩沖液 HerculesHot-Start 聚合酶HerculesHot