實驗方法原理 通過一種有效的蛋白酶(如蛋白酶 K ) 的消化作用及隨后的酚:氯仿抽提,就能從大規模制備的 λ 噬菌體中很好地分離到 DNA。該方法也適用于小量(50~100 ml ) 制備物。實驗材料 蛋白酶 K限制性內切核酸酶λ 噬菌體顆粒試劑、試劑盒 氯仿透析緩沖液EDTA乙醇酚酚:氯仿SDS乙酸鈉TE儀器、耗材 瓊脂糖凝膠Sorvall SS-34 轉子或相當型號硼硅酸鹽巴斯德吸管水浴實驗步驟 一、材料1. 緩沖液和溶液(1) 氯仿(2) 透析緩沖液10 mmol/L NaCl50 mmol/L Tris-Cl(pH 8.0)10 mmol/L MgCl2需要兩份透析緩沖液,每份為噬菌體溶液體積的 1000 倍,室溫保存。(3) EDTA ( 0.5 mol/L,pH 8.0)(4) 乙醇(5) 酚(6) 酚:氯仿(1:1,V/V)(7) SDS (10%,m/V)(8) 乙酸鈉(3 mol/L,pH 7.0)(9) TE......閱讀全文
實驗方法原理 通過一種有效的蛋白酶(如蛋白酶 K ) 的消化作用及隨后的酚:氯仿抽提,就能從大規模制備的 λ 噬菌體中很好地分離到 DNA。該方法也適用于小量(50~100 ml ) 制備物。實驗材料 蛋白酶 K限制性內切核酸酶λ 噬菌體顆粒試劑、試劑盒 氯仿透析緩沖液EDTA乙醇酚酚:氯仿SDS乙
實驗方法原理 通過一種有效的蛋白酶(如蛋白酶 K ) 的消化作用及隨后的酚:氯仿抽提,就能從大規模制備的 λ 噬菌體中很好地分離到 DNA。該方法也適用于小量(50~100 ml )
實驗方法原理 可用甲酰胺代替 SDS/蛋白酶 K 將純化的噬菌體顆粒去除外殼。這種方法雖然不是很有效,但在某種意義上它比以前的操作方法更快。實驗材料 限制性內切核酸酶λ 噬菌體顆粒試劑、試劑盒 EDTA乙醇甲酰胺NaClTETris-Cl儀器、耗材 瓊脂糖凝膠硼硅酸鹽巴斯德吸管實驗步驟 一、材料1.
實驗方法原理 可用甲酰胺代替 SDS/蛋白酶 K 將純化的噬菌體顆粒去除外殼。這種方法雖然不是很有效,但在某種意義上它比以前的操作方法更快。
實驗方法原理 從大規模培養物中制備的 λ 噬菌體,可在高鹽存在下用聚乙二酵 ( PEG ) 沉淀的辦法從裂解物中回收得到。殘余的細胞碎片和 PEG 可用氯仿抽提。在進一步純化之前,建
實驗方法原理 從大規模培養物中制備的 λ 噬菌體,可在高鹽存在下用聚乙二酵 ( PEG ) 沉淀的辦法從裂解物中回收得到。殘余的細胞碎片和 PEG 可用氯仿抽提。在進一步純化之前,建議測定噬菌體制備物的得率。實驗材料 大腸桿菌培養物試劑、試劑盒 氯仿NaCl聚乙二醇SM胰 DNaseⅠ儀器、耗材 S
材料:緩沖液和溶液:氯仿NaCl(固體)聚乙二醇(PEG 8000)SM酶和緩沖液:胰Dnase I (1mg/ml)胰Dnase I (1mg/ml)于TE中(ph7.6)離心機和轉子:Sorvall GSA 轉子或相當型號專用設備:量筒(2L)載體和菌株:大腸桿菌培養物,經λ噬菌體感
實驗方法原理 λ 噬菌體的大量制備可通過低倍數感染細菌培養物或高倍數感染這兩種方法獲得。低倍數感染后,培養物立即被轉接至大體積培養物中。因為在最初細菌培養物中只有小量的細胞被感染,所以轉接后的細菌培養物中的未感染細胞在隨后的數小時內將進一步分裂生長。實驗材料 λ 噬菌體原種試劑、試劑盒 氯仿SM儀器
實驗方法原理 λ 噬菌體的大量制備可通過低倍數感染細菌培養物或高倍數感染這兩種方法獲得。低倍數感染后,培養物立即被轉接至大體積培養物中。因為在最初細菌培養物中只有小量的細胞被感染,所
蛋白酶k是一種枯草蛋白酶類的高活性蛋白酶,用于生物樣品中蛋白質的一般降解。從林伯氏白色念球菌(tritirachiumalbumlimber)中純化得到。蛋白酶K,是一種切割活性較廣的絲氨酸蛋白酶。它切割脂族氨基酸和芳香族氨基酸的羧基端肽鍵。此酶經純化去除了RNA酶和DNA酶活性。由于蛋白酶K在尿