一、提取抗原蛋白 將提取RNA途中留存的樣品,加入150μl100%酒精充分混勻,靜置 5min(RT),2000×g,4℃離心5min,吸取上清至新管中,加入750μl異丙醇,混勻,靜置10min(RT),12000×g,4℃離心 10min,棄上清,加入1ml0.3mol/L鹽酸胍/95%酒精重懸沉淀,用加樣器打散沉淀,混旋20~30秒,靜置 20min(RT),7500×g,4℃離心5min,棄上清,重新加入1ml0.3mol/L鹽酸胍/95%酒精兩次,重懸沉淀,離心后棄上清,加入 100%無水乙醇1ml,混旋1min,靜置20min(RT),7500×g,4℃離心5min,棄上清,真空干燥5min,50μl1%SDS溶解沉淀,用50℃熱水助溶,直至全部溶解。10000×g,離心10min,去除沉渣。 二、蛋白定量 1. 取PBS、各樣品10ul,加DW990ul 2.取DW......閱讀全文
Western免疫印跡(Western Blot)是將蛋白質轉移到膜上,然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白,可用相應抗體作為一抗進行檢測,對新基因的表達產物,可通過融合部分的抗體檢測。 本文主要通過以下幾個方面來詳細地介紹一下Western Blot技術: 一、原理 二、分類
Western免疫印跡(Western Blot)是將蛋白質轉移到膜上,然后利用抗體進行檢測。對已知表達蛋白,可用相應抗體作為一抗進行檢測,對新基因的表達產物,可通過融合部分的抗體檢測。一、原理與Southern或Northern雜交方法類似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳,被
四、主要步驟 生物秀為您搜集了現階段幾乎網上所有的Western Blot的中英文資料,僅供實驗參考,可以根據自己實驗的實際情況進行調整: Western Blot PROTOCOL: 點擊查看所有相關文章 五、 實驗常見的問題指南 根據問題的類型主要分成以下幾類(以
實驗室里經常聽到這樣的抱怨:實驗沒做好,實驗沒結果,心情郁悶。但其實靜下心來查找原因,往往是由于操作上面的不認真,或是一些小小的細節沒有注意到,以下是10個實驗室日常小技巧。 主題: 關于質粒提取的小技巧 內容: 現在用質粒提取試劑盒非常方便,而且菌體培
1、質粒DNA提取 提取質粒的時候,最后一步的酒精揮發很關鍵,基本上是其后續的酶切反應的決定性因素。所以這一步盡量揮發長一點時間,最好是空調吹熱風,或是37度溫箱放長一點的時間,我試過室溫過夜,酶切很好。 將amp濃度提高到200ug/ml,下班前接種,次日一早收獲菌體,此時OD雖然不高,質