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蛋白質印跡是生化實驗室中最常見的程序之一。基本上,它從大小上將蛋白質與樣品分開,然后使用抗體進行測試以確定是否存在給定的蛋白質。它不僅在研究中有用,而且在醫學或診斷實驗室中也有用。例如,針對HIV和萊姆病的檢測均包括酶聯免疫吸附測定(ELISA)檢測,如果ELISA檢測呈陽性,則進行蛋白質印跡分析。然而,盡管它很流行,但是蛋白質印跡具有一些缺點。非量化古典蛋白質印跡是非定量的。換句話說,盡管他們可以告訴研究人員是否存在某種特定的蛋白質,但他們無法量化存在多少蛋白質。一些生物技術公司現在出售試劑盒,使研究人員或實驗室技術人員能夠使用標準曲線定量蛋白質的含量-但這僅在有相同蛋白質的純樣品可用時才有效。此外,蛋白質的分子量只能通過蛋白質印跡法估算,而不能像質譜法那樣精確確定。抗體僅當可獲得針對目的蛋白的一抗時,才能進行蛋白質印跡。生物技術公司可以提供許多不同蛋白質的抗體,但它們并不便宜;如果無法使用給定蛋白質的一抗,則無法進行蛋白質印......閱讀全文
蛋白質印跡是生化實驗室中最常見的程序之一。基本上,它從大小上將蛋白質與樣品分開,然后使用抗體進行測試以確定是否存在給定的蛋白質。它不僅在研究中有用,而且在醫學或診斷實驗室中也有用。例如,針對HIV和萊姆病的檢測均包括酶聯免疫吸附測定(ELISA)檢測,如果ELISA檢測呈陽性,則進行蛋白質印跡分析。
蛋白質印跡法(免疫印跡試驗)即Western Blot。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中表達情況的信息。
蛋白質印跡法（免疫印跡試驗）即Western Blot。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中表達情況的信息。 蛋白質印跡法是由瑞士米歇爾弗
值得一提的是，western blot這個名稱的由來很有意思。最開始做印跡工作的是一個叫做Edwin Southern的科學家，但印跡的對象是DNA鏈，他把這種技術稱為Southern blot，后來類似的出現了兩個過程相似，但是對象不同的印跡方法，一個針對RNA，一個針對蛋白質，人們分別把這兩種技
Western Blot顯色的方法主要有以下幾種： i. 放射自顯影 ii. 底物化學發光ECL iii. 底物熒光ECF iv. 底物DAB呈色 現常用的有底物化學發光ECL和底物DAB呈色，體同水平和實驗條件的是用第一種方法，發表文章通常是用底物化學發光ECL。只要買現成的試劑盒就行
與Southern Blot或Northern Blot雜交方法類似，但Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經過PAGE（聚丙烯酰胺凝膠電泳）分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附
實驗材料蛋白質樣品試劑、試劑盒裂解液PBSG 250考馬斯亮藍溶液NaClSDS上樣緩沖液電泳緩沖液轉移緩沖液麗春紅染液封閉液TBSTTBS洗脫抗體緩沖液顯影液定影液抗體化學發光試劑儀器、耗材高壓鍋玻璃勻漿器高速離心機分光光度儀-20℃低溫冰箱垂直板電泳轉移裝置恒溫水浴搖床多用脫色搖床實驗步驟一、操
蛋白質印跡法（免疫印跡試驗）即Western Blot。它是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質在所分析的細胞或組織中表達情況的信息。 與Southern Blo
很多小伙伴在對膠片印跡進行短暫曝光后，檢測不到目的蛋白。可從以下幾個方面來優化實驗步驟：1、裂解物制備每道全細胞提取物的 20–30 ?g 總蛋白，通常足夠用來檢測。如果靶標蛋白的基礎水平，或蛋白質修飾程度低，可能需要通過化學刺激劑來誘導表達或修飾。你可能要調查備選細胞系或組織，其所含的目的蛋白含量
與Southern Blot或Northern Blot雜交方法類似，但Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質，“探針”是抗體，“顯色”用標記的二抗。經過PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)分離的蛋白質樣品，轉移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附