RTPCR技術的定義和檢測方法
1.定義：是以RNA為模板，聯合逆轉錄反應（reverse transcription，RT）與PCR，可用于檢測單個細胞或少數細胞中少于10個拷貝的RNA 模板。 RNA擴增包括兩個步驟：在單引物的介導下和逆轉錄酶的催化下，合成RNA的互補cDNA；加熱后cDNA與RNA鏈解離，然后與另一引物退火，并由DNA聚合酶催化引物延伸生成雙鏈靶DNA，最后擴增靶DNA。 2.檢測方法 ⑴一步法：利用同一緩沖液，在同一體系中加入逆轉錄酶、引物、Taq酶、4種dNTP 直接進行mRNA反轉錄與PCR擴增。Taq酶不僅具有DNA多聚酶的作用，而且具有反轉錄酶活性，可利用其雙重作用在同一體系中直接以mRNA為模板進行反轉錄和其后PCR擴增，從而使mRNA的PCR步驟更為簡化。所需樣品量減少到最低限度，臨床小樣品的檢測非常有利。用一步法擴增可檢 測出總RNA中小于1n......閱讀全文
RTPCR技術的定義和檢測方法
? ?1.定義：是以RNA為模板，聯合逆轉錄反應（reverse transcription，RT）與PCR，可用于檢測單個細胞或少數細胞中少于10個拷貝的RNA 模板。 RNA擴增包括兩個步驟：在單引物的介導下和逆轉錄酶的催化下，合成RNA的互補cDNA；加熱后cDNA與RNA鏈解離，然后與另一引
RTPCR的定義與檢測方法
1.定義：是以RNA為模板，聯合逆轉錄反應（reverse transcription，RT）與PCR，可用于檢測單個細胞或少數細胞中少于10個拷貝的RNA模板。?RNA擴增包括兩個步驟： 在單引物的介導下和逆轉錄酶的催化下，合成RNA的互補cDNA；加熱后cDNA與RNA鏈解離，然后與另一引物退火
什么是RTPCR，RTPCR的定義與檢測方法？
1.定義：是以RNA為模板，聯合逆轉錄反應（reverse transcription，RT）與PCR，可用于檢測單個細胞或少數細胞中少于10個拷貝的RNA模板。?RNA擴增包括兩個步驟： 在單引物的介導下和逆轉錄酶的催化下，合成RNA的互補cDNA；加熱后cDNA與RNA鏈解離，然后與另一引物退火
RTPCR技術的定義
RT-PCR，反轉錄·聚合酶鏈反應（reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR）是將RNA的反轉錄（reverse transcription ）和cDNA的聚合酶鏈式擴增（PCR）相結合的技術。
RTPCR技術簡介和RTPCR引物的選擇
RT-PCR簡介RT-PCR是將RNA的反轉錄（RT）和cDNA的聚合酶鏈式擴增（PCR）相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR技術靈敏而且用途廣泛，可用于檢測細胞中基因表達水平，細胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cD
原位PCR技術的定義和方法介紹
1.概述：原位PCR就是在組織細胞里進行PCR反應，它結合了具有細胞定位能力的原位雜交和高度特異敏感的PCR技術的優點，是細胞學科研與臨床診斷領域里的一項有較大潛力的新技術。原位PCR是Hasse等于1990年建立的，實驗用的標本是新鮮組織、石蠟包埋組織、脫落細胞、血細胞等.2.其基本方法為? ?
RTPCR技術的進行過程及方法
RT-PCR可以用一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在最佳條件下進行。cDNA的合成首先在反轉錄RT-PCR可以用一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在最佳條件下進行。cDNA的合成首先在反轉錄緩沖液中進行，然后取出1/10的反應產物進行PCR。在一步法
RTPCR檢測方法的具體步驟
RT-PCR檢測方法的具體步驟如下：（一）RNA提取1、根據標本數量分裝RLT液：從Kit中取出RLT液，用1.5mL離心管分裝，每管500μL（在體系配制區操作）。2、在生物安全柜內將采樣液（鼻拭子、咽拭子、胸水等）或病毒培養物（雞胚尿囊液或細胞培養液）取100μL加入RLT液管中，充分混勻。 3
RTPCR檢測方法的具體步驟
RT-PCR檢測方法的具體步驟如下：（一）RNA提取1、根據標本數量分裝RLT液：從Kit中取出RLT液，用1.5mL離心管分裝，每管500μL（在體系配制區操作）。2、在生物安全柜內將采樣液（鼻拭子、咽拭子、胸水等）或病毒培養物（雞胚尿囊液或細胞培養液）取100μL加入RLT液管中，充分混勻。 3
RTPCR檢測方法的具體步驟
RT-PCR檢測方法的具體步驟如下：（一）RNA提取1、根據標本數量分裝RLT液：從Kit中取出RLT液，用1.5mL離心管分裝，每管500μL（在體系配制區操作）。2、在生物安全柜內將采樣液（鼻拭子、咽拭子、胸水等）或病毒培養物（雞胚尿囊液或細胞培養液）取100μL加入RLT液管中，充分混勻。 3
無損檢測技術定義
損檢測是指在不損害或不影響被檢測對象使用性能,不傷害被檢測對象內部組織的前提下，利用材料內部結構異常或缺陷存在引起的熱、聲、光、電、磁等反應的變化，以物理或化學方法為手段，借助現代化的技術和設備器材，對試件內部及表面的結構、性質、狀態及缺陷的類型、性質、數量、形狀、位置、尺寸、分布及其變化進行檢查和
RTPCR技術檢測豬流感病毒
?根據豬流感病毒siv的M 基因的序列，設計合成了1對引物，建立了檢測豬流感的RT-PCR方法。應用該方法對Hl、H3、H9亞型的豬流感病毒進行基因擴增，均獲得了分子量為460bp的特異性目的片段，而對PRRSV、PCV2、PI 、CSFV進行同條件檢測，結果均為陰性；SIV擴增產物測序結果與SIV
RTPCR引物設計原則和方法
在NCBI上搜索到該基因，找到該基因的mRNA，在CDS選項中，找到編碼區所在位置，在下面的origin中，Copy該編碼序列作為軟件查詢序列的候選對象。打開Primer Premier5，點擊File-New-DNA sequence, 出現輸入序列窗口，Copy目的序列在輸入框內（選擇As），此
RTPCR引物設計原則和方法
在NCBI上搜索到該基因，找到該基因的mRNA,在CDS選項中，找到編碼區所在位置，在下面的origin中，Copy該編碼序列作為軟件查詢序列的候選對象。打開Primer Premier5，點擊File-New-DNA?sequence，出現輸入序列窗口，Copy目的序列在輸入框內（選擇As），此窗
不對稱PCR技術的定義和方法介紹
不對稱PCR(asymmetric PCR)是用不等量的一對引物，PCR擴增后產生大量的單鏈DNA(SSDNA)。這對引物分別稱為非限制引物與限制性引物，其比例一般為50——100:1。在PCR反應的最初10——15個循環中，其 擴增產物主要是雙鏈DNA，但當限制性引物(低濃度引物)消耗完后，非限制
PCR（RTPCR）反轉錄－定性檢測方法
1、試劑 (1)10倍 RT 緩沖液:500mmol/L Tris·Cl(pH8.0),0.60 mmol/L MgCl2,400mmol/L KCl,10mmol/L DTT。 (2)10倍 PCR 緩沖液:100mmol/L Tris·Cl(pH8.3),500mmol/L kCl,15
RTPCR技術的簡介
RT -PCR首先經反轉錄酶的作用以RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR技術靈敏而且用途廣泛，可用于檢測細胞中基因表達水平、細胞中RNA病毒的含量和直接克隆特定基因的cDNA序列。作為模板的RNA可以是總RNA、mRNA或體外轉錄的RNA產物。無論使用何種RN
RTPCR技術的簡介
RT—PCR（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction）是將RNA的反轉錄（RT）和cDNA的聚合酶鏈式擴增（PCR）相結合的技術。首先經反轉錄酶的作用，從RNA合成cDNA，再以cDNA為模板，在DNA聚合酶作用下擴增合成目的片段。RT—PCR
雜交的定義和技術應用
雜交（hybridization；cross；crossing）定義：兩條單鏈DNA或RNA的堿基配對。遺傳學中經典的也是常用的實驗方法。通過不同的基因型的個體之間的交配而取得某些雙親基因重新組合的個體的方法。一般情況下，把通過生殖細胞相互融合而達到這一目的過程稱為雜交；而把由體細胞相互融合達到這一
篩選的定義和方法
篩選是利用篩子使物料中小于篩孔的細粒物料透過篩面，而大于篩孔的粗粒物料滯留在篩面上，從而完成粗、細料分離的過程。該分離過程可看作是物料分層和細粒透篩兩個階段組成的。物料分層是完成分離的條件，細粒適篩是分離的目的。
RTPCR技術2
三：操作１：反轉錄反應按下表準備反應液樣品 體積 終濃度５×反應緩沖液 10μl １×dNTP混合液 1μl 0.2mM下游引物 50pmol* 1μm上游引物 50pmol* 1μm25mM MgSO4 2μL 1mMAMV反轉錄酶 1μl 0.1μ/μlTflDNA聚合酶 1μl 0.1μ/μl
RTPCR技術1
目前已有多種方法用來研究有關細胞和組織中，基因表達產物方面的內容，這些方法主要有Northern印跡、RNase保護分析法、原位雜交、點印跡、Ｓ１核酸酶分析法及反轉錄與PCR擴增串聯的RT-PCR技術等。在這些方法中RT-PCR技術具敏感度高和應用范圍廣的特點，該技術提供給研究人員有效的進行測定轉錄
TUNEL檢測的定義和原理
基因組DNA斷裂時，暴露的3’-OH可以在末端脫氧核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT) 的催化下加上熒光素?(FITC) 標記的dUTP (fluorescein-dUTP) ，從而可以通過熒光顯微鏡或流式細胞儀進行檢測，這就是TUNE
RTPCR技術的影響因素
（一）組織或細胞樣本不是每種組織或細胞都表達所有的基因，即某些基因的mRNA不存在于某些組織或細胞中。因此，確定所選用的材料中是否含有需擴增的目標mRNA模板是實驗成敗的關鍵。（二）引物合成cDNA第一條鏈時，引物可用隨機6聚核苷酸，或下游引物，或poly（dT），其中以6聚核苷酸的隨機引物效果最好
RTPCR技術的操作步驟
1、從RNA（或mRNA）反轉錄合成cDNA第一鏈：2、于95℃加熱5～10min，滅活反轉錄酶，使RNA—cDNA雜交體變性，然后迅速冰浴冷卻：3、PCR擴增：方法基本同PCR。cDNA第一鏈合成方法：20ul反應液中含10xPCR擴增緩沖液，2ul；四種dNTP（10 mmol/L）2ul；RN
CRISPR基因編輯技術的定義和技術原理
CRISPR（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats）是生命進化歷史上，細菌和病毒進行斗爭產生的免疫武器，簡單說就是病毒能把自己的基因整合到細菌，利用細菌的細胞工具為自己的基因復制服務，細菌為了將病毒的外來入侵基因清除，
組織芯片的定義和技術特點
組織芯片(tissue chip)，也稱組織微陣列(tissue microarrays)，是生物芯片技術的一個重要分支，是將許多不同個體組織標本以規則陣列方式排布于同一載體（使用載玻片最多）上，進行同一指標的原位組織學研究。該技術自1998年問世以來，以其大規模、高通量、標準化等優點得到大范圍的推
表達篩選的定義和方法
中文名稱表達篩選英文名稱expression screening定 義(1)通過基因表達對組織、細胞或個體進行的篩選。(2)通過所用載體內含抗生素抗性基因、報道基因等的表達去篩選轉化子的方法。(3)通過自身或融合表達的蛋白質的某種特性(如綠色熒光蛋白)進行篩選的方法。應用學科生物化學與分子生物學（
JAM檢測技術檢測原理和實驗方法
JAM檢測技術是用于測定細胞死亡或凋亡的方法，如51Cr稀放法事基于細胞死亡往往伴隨有細胞膜破裂及細胞質的釋放，用51Cr或125I標記相關的靶細胞，與效應細胞共培養一定時間后，測定一定體積的培養上清中的放射性計數，以反映細胞損傷情況。而人們發現，細胞死亡的早期反應，細胞內DNA被酶裂解成180kb
基因分型定量檢測技術的定義
基因分型定量檢測系統是國際上在傳染病流行病學應用中最廣泛的檢測診斷系統。主要通過基因芯片對HPV、HSV等DNA病毒進行檢測，分析基因表達的類型，了解基因功能，從而指導疾病的診斷、預后、病理分析、治療等各種研究。基因芯片主要用于DNA 突變分析、基因譜差異分析、基因診斷分析和大規模基因類型分析。?基