博納艾杰爾不同基質食品中鄰苯二甲酸酯檢測的解決方案

　　隨著現代食品工業的發展，人們為了增加食品的風味、改善色澤和延長貨架期等，采用了多種現代食品加工技術，但是不幸的是，由于種種原因，在某些食品加工過程中使用了危害人們健康的物質，比如最近出現的食品中添加“塑化劑”鄰苯二甲酸酯類物質。

　　以往，由于人們對鄰苯二甲酸酯類的安全性認識不足，多種食品都涉嫌“被添加”。博納艾杰爾科技根據不同食品基質的具體情況，開發了一系列的檢測方案，以供大家參考。

　　相關產品或技術咨詢請撥打400-606-8099或E-mail至service@agela.com.cn

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　　1.水性樣品

　　此類樣品包括瓶裝純凈水、礦泉水，茶、果汁和功能飲料等;某些可水溶解的固體樣品。可以先制成水溶液，然后全部作為待處理液，如無脂糖果。推薦前處理柱為Cleanert DEHP (500mg/6mL)。

　　樣品處理：取10mL樣品，進行固相萃取富集處理

　　固相萃取方法：

　　活化：5mL甲醇、5mL水

　　上樣：10mL水性樣品

　　淋洗：5mL5%甲醇水，真空抽干20min。

　　洗脫：5mL甲醇

　　檢測：將洗脫液用氮氣吹干后，以1mL甲醇定容，然后用液相色譜法檢測。

　　說明：此法多適用于配套液相色譜檢測，當樣品中鄰苯二甲酸酯類的含量較低時，需要采用固相萃取富集才能檢測的情況。

　　一般來說，對于此類樣品，可以采用正己烷液液萃取的辦法，用GC/MS(靈敏度較高)直接檢測。

　　2.低脂液體樣品

　　此類樣品包含液態奶制品、果醬、糖漿等。推薦前處理產品為Cleanert MAS-PAE管。

　　樣品處理：向玻璃離心管中加入2mL樣品，然后加入4mL乙腈：甲基叔丁基謎(9:1，V/V)，將離心管渦旋2min，最后加入Cleanert MAS-PAE填料，再將離心管渦旋振蕩2min后，以4000rpm的轉速離心5min，取上清液，以鄰苯二甲酸酯檢測專用針式過濾器過濾后，待檢。

　　檢測：GC/MS檢測。

　　3.低脂固體食品

　　此類樣品包括奶粉、餅干、糕點、果凍、奶糖等，推薦產品為Cleanert MAS-PAE管。

　　樣品處理：取1g已制成粉末狀的樣品，2mL水，加入到Cleanert MAS-PAE離心管中，然后加入4mL乙腈：甲基叔丁基謎(9:1，V/V)，將離心管渦旋2min，最后加入Cleanert MAS-PAE填料，再將離心管渦旋振蕩2min后，以4000rpm的轉速離心5min，取上清液，以鄰苯二甲酸酯檢測專用針式過濾器過濾后，待檢。

　　檢測：GC/MS檢測。

　　4.高脂樣品

　　此類樣品包括植物油脂、動物油脂、奶酪、動物組織性食品等，推薦前處理柱為Cleanert PAE。

　　4.1 動植物油脂樣品的處理

　　取0.2g樣品，用1mL正己烷溶解，作為待凈化液。

　　固相萃取方法：

　　活化：5mL正己烷

　　上樣：全部待凈化液

　　淋洗：7mL正己烷

　　洗脫：3mL乙酸乙酯：正己烷(50:50，v/v)，洗脫2次，合并洗脫液。

　　40℃氮吹至近干(目視只剩少許粘稠油狀物體)，加入1mL乙腈反萃取，渦旋振蕩3min，以4000rpm轉速，離心5min，輕輕地將上清液倒入2mL玻璃樣品瓶中，作為待檢液。

　　檢測：GC/MS檢測。

　　4.2其他樣品的處理

　　取樣品0.5g，以5mL正己烷于密封玻璃瓶中超聲提取，然后以4000rpm轉速，離心5min，取上清液作為待凈化液。若樣品中含有水，視情況加入適量無水硫酸鈉后，再進行上述操作。

　　固相萃取方法：

　　活化：5mL正己烷

　　上樣：全部待凈化液

　　淋洗：3mL正己烷

　　洗脫：3mL乙酸乙酯：正己烷(50:50，v/v)，洗脫2次，合并洗脫液。

　　40℃氮吹至近干(目視只剩少許粘稠油狀物體)，加入1mL乙腈反萃取，渦旋振蕩3min，以4000rpm轉速，離心5min，輕輕地將上清液倒入2mL樣品瓶中，作為待檢液。

　　檢測：GC/MS檢測。

　　5.復雜樣品

　　此類樣品多為油水混合態，同時添加有多種風味物質，成分比較復雜，包括方便面調味包，醬油、醋、用來調味的其它醬汁等。根據樣品中的脂肪含量，對于高脂樣品推薦前處理柱為Cleanert PAE-C柱，對于低脂樣品推薦使用Cleanert MAS-PAEc管。

　　5.1 以Cleanert PAE-C柱進行樣品處理，以方便面調味包為例：

　　取0.5g樣品，加入5mL正己烷，渦旋振蕩3min后，再加入500mg無水硫酸鈉，渦旋振蕩3min后，以4000rpm轉速，離心5min，取全部上清液作為待凈化液。

　　固相萃取方法：

　　活化：5mL正己烷

　　上樣：全部待凈化液

　　淋洗：3mL正己烷

　　洗脫：3mL乙酸乙酯：正己烷：甲苯(50:40:10，v/v)，洗脫2次，合并洗脫液。40℃氮吹至近干(目視只剩少許粘稠油狀物體)，加入1mL乙腈反萃取，渦旋振蕩3min，以4000rpm轉速，離心5min，輕輕地將上清液倒入2mL樣品瓶中，作為待檢液。

　　檢測：GC/MS檢測。

　　5.2 以Cleanert MAS-PAEc管進行樣品前處理，以醬油為例

　　樣品處理：向Cleanert MAS-PAE離心管中加入2mL樣品，然后加入4mL乙腈：甲苯(9:1，V/V)，將離心管渦旋2min，最后加入Cleanert MAS-PAEc填料，再將離心管渦旋振蕩2min后，以4000rpm的轉速離心5min，取上清液，以鄰苯二甲酸酯檢測專用針式過濾器過濾后，待檢。

　　檢測：GC/MS檢測。

　　附件一：

高效液相色譜法檢測15種鄰苯二甲酸酯的含量

　　色譜柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5μm，150?(訂貨號：VX952505-L)

　　流動相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50

Time/min	A/%	B/%
0	40	60
2	50	50
10	60	40
12	70	30
20	70	30
31	100	0
40	100	0
40.01	40	60

　　流 速：1.0 mL/min

　　波 長：242 nm

　　進樣量：5 μL（100ppm），50μL（10ppm）

　　樣 品：15種鄰苯二甲酸酯

　　濃 度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流動相A）

　　溶 劑：正己烷 /40%流動相A

　　柱 溫：30℃

圖1 鄰苯二甲酸酯標準品HPLC色譜圖(樣品濃度：10ppm)

　　（鄰苯二甲酸二甲酯DMP，鄰苯二甲酸二乙酯DEP，鄰苯二甲酸二正丁酯DBP，鄰苯二甲酸二辛酯DEHP，鄰苯二甲酸丁芐酯BBP，鄰苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，鄰苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，鄰苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，鄰苯二甲酸二戊酯DPP，鄰苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，鄰苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，鄰苯二甲酸二環己酯DCHP，鄰苯二甲酸二異丁酯DIBP，鄰苯二甲酸二己酯DNP，鄰苯二甲酸二壬酯DINP）

　　結論：Agela Venusil XBP C18-L色譜柱能夠較好的分離15種鄰苯二甲酸酯類物質，分離度較好，完全滿足LC檢測15種鄰苯二甲酸酯類物質的含量。由于條件所限，筆者手頭上只有15種鄰苯二甲酸酯物質，所做實驗，供大家參考。

　　

　　附件二

氣質聯用法檢測15種鄰苯二甲酸酯

　　

　　儀器：Agilent 7890/5975 GC/MS

　　色譜條件：

　　色譜柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm

　　進樣口：250℃，不分流進樣

　　程序升溫：50℃（1min）20℃/min 220℃（1min）5℃/min 280℃（4min）

　　進樣量：1μL

　　流速：1 mL/min

　　

　　質譜條件：

　　接口溫度：280℃

　　電離方式：EI

　　電離能量：70eV

　　溶劑延遲：7min

　　監測方式：SIM模式，監測離子見下表

　　

序號	保留時間/min	中文名稱	英文縮寫	SIM離子
1	8.265	鄰苯二甲酸二甲酯	DMP	163、77
2	9.135	鄰苯二甲酸二乙酯	DEP	149、177
3	10.888	鄰苯二甲酸二異丁酯	DIBP	149、223
4	11.637	鄰苯二甲酸二丁酯	DBP	149、223
5	11.979	鄰苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59、149、193
6	12.72	鄰苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149、251
7	13.044	鄰苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45、72
8	13.41	鄰苯二甲酸二戊酯	DPP	149、237
9	15.552	鄰苯二甲酸二己酯	DHXP	104、149、76
10	15.694	鄰苯二甲酸丁基芐基酯	BBP	149、91
11	17.153	鄰苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149、223
12	17.81	鄰苯二甲酸二環己酯	DCHP	149、167
13	18.056	鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149、167
14	20.444	鄰苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149、279
15	22.98	鄰苯二甲酸二壬酯	DNP	57、149、71

　　結論：Agela DA-5ms氣相色譜柱能夠很好的分離15種鄰苯二甲酸酯類物質，完全滿足15種鄰苯二甲酸酯類物質的幾十ppb級含量的定量測定。由于條件所限，筆者手頭上只有15種鄰苯二甲酸酯物質，所做實驗，供大家參考。

　　

　　附件三

牛奶中15種鄰苯二甲酸酯的添加回收率

　　按正文第2項方法進行某種牛奶的添加回收率實驗，得到的數據如下：

　　表1、某種牛奶中添加15種鄰苯二甲酸酯(在樣品中的濃度為50μg/L)的回收率結果列表

序號	保留時間/min	中文名稱	英文縮寫	回收率
1	8.337	鄰苯二甲酸二甲酯	DMP	87.82%
2	9.214	鄰苯二甲酸二乙酯	DEP	72.31%
3	10.996	鄰苯二甲酸二異丁酯	DIBP	81.97%
4	11.759	鄰苯二甲酸二丁酯	DBP	77.33%
5	12.11	鄰苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	83.87%
6	12.864	鄰苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	83.83%
7	13.201	鄰苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	109.08%
8	13.576	鄰苯二甲酸二戊酯	DPP	86.36%
9	15.757	鄰苯二甲酸二己酯	DHXP	84.67%
10	15.923	鄰苯二甲酸丁基芐基酯	BBP	98.33%
11	17.377	鄰苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	101.30%
12	18.041	鄰苯二甲酸二環己酯	DCHP	92.47%
13	18.28	鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	132.32%
14	20.718	鄰苯二甲酸二正辛酯	DNOP	89.73%
15	23.303	鄰苯二甲酸二壬酯	DNP	70.10%

某植物油中15種鄰苯二甲酸酯的添加回收率

　　按正文第4.1項方法進行某種牛奶的添加回收率實驗，得到的數據如下：

　　表2、某植物油中添加15種鄰苯二甲酸酯(在樣品中的濃度為500μg/L)的回收率結果列表

序號	保留時間/min	中文名稱	英文縮寫	回收率
1	8.337	鄰苯二甲酸二甲酯	DMP	149.97%
2	9.214	鄰苯二甲酸二乙酯	DEP	93.49%
3	10.996	鄰苯二甲酸二異丁酯	DIBP	125.70%
4	11.759	鄰苯二甲酸二丁酯	DBP	136.89%
5	12.11	鄰苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	90.84%
6	12.864	鄰苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	82.29%
7	13.201	鄰苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	106.38%
8	13.576	鄰苯二甲酸二戊酯	DPP	88.14%
9	15.757	鄰苯二甲酸二己酯	DHXP	75.32%
10	15.923	鄰苯二甲酸丁基芐基酯	BBP	89.56%
11	17.377	鄰苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	105.05%
12	18.041	鄰苯二甲酸二環己酯	DCHP	72.94%
13	18.28	鄰苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	124.27%
14	20.718	鄰苯二甲酸二正辛酯	DNOP	78.19%
15	23.303	鄰苯二甲酸二壬酯	DNP	75.27%