CCK8操作說明
細胞活性檢測
1. 在96 孔板中接種細胞懸液 (100 ml /孔 ) 。將培養板放在培養箱預培養 (在37 ℃，5% CO2的條件下 )。
2. 向每孔加入10 ml 的CCK- 8溶液 (注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響 O.D值的讀數) 。
3. 將培養板在培養箱內孵育 1-4小時。
4. 用酶標儀測定在450 nm處的吸光度。
5. 如果暫時不測定O.D值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入 10 ml0.1 M HCl溶液或者1% w/vSDS 溶液，并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在 24小時內吸光度不會發生變化。
細胞增殖 -毒性檢測
1. 在96 孔板中配制 100 ml的細胞懸液。將培養板在培養箱預培養 24小時 ( 在37℃， 5% CO2的條件下 )。
2. 向培養板加入10 ml不同濃度的待測物質。
3. 將培養板在培養箱孵育一段適當的時間 (例如: 6,12, 24 或48小時 )。
4. 向每孔加入10 ml CCK-8 溶液 (注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響 O.D值的讀數) 。
5. 將培養板在培養箱內孵育 1-4小時。
6. 用酶標儀測定在450 nm處的吸光度。
7. 如果暫時不測定O.D值，打算以后測定的話，可以向每孔中加入 10 ml 0.1 M HCl溶液或者1%w/vSDS 溶液，并遮蓋培養板避光保存在室溫條件下。在 24小時內吸光度不會發生變化。
注意：如果待測物質有氧化性或還原性的話，可在加 CCK-8之前更換新鮮培養基，去掉藥物的影響。當然藥物影響比較小的情況可以不更換培養基，直接扣除培養基中加入藥物后的空白吸收即可。
制作標準曲線
1. 先用細胞計數板計數所制備的細胞懸液中的細胞數量，然后接種細胞。
2. 按比例 ( 例如：1/2比例 ) 依次用培養基等比稀釋成一個細胞濃度梯度，一般要做 3-5個細胞濃度梯度，每組3-6個復孔。
3. 接種后培養2-4 小時使細胞貼壁，然后加 CCK-8試劑培養一定時間后測定 O.D值，制作出一條以細胞數量為橫坐標 (X軸) ，O.D值為縱坐標 (Y軸) 的標準曲線。根據此標準曲線可以測定出未知樣品的細胞數量 (使用此標準曲線的前提條件是實驗的條件要一致，便于確定細胞的接種數量以及加入 CCK-8后的培養時間)。
同仁CCK8檢測步驟
CCK-8 檢測步驟
1. 向各孔中加入100 μl細胞懸液。a)
2. 在37℃下預孵育培養板。b)
3. 向各孔中加入各濃度的待測溶液c)10 μl。
4. 37℃下孵育。
5. 向各孔中加入10 μl的CCK-8溶液d)。
6. 37℃下孵育1-4小時。e)
7. 測定450 nm處的OD值。
a) 使用適當的培養基制備50,000-100,000個/ml的細胞懸液。
b) 建議使用CO2培養箱過夜預培養。
c) 使用培養基或PBS來制備溶液。
d) 如果待測溶液有還原性，測定不含細胞，但含有CCK-8的待測溶液在450 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入CCK-8 ，如果吸光度相對較大，則需要除去培養基，并用培養基洗滌細胞兩次，然后加入新的100 μl培養基和10 μl CCK-8進行檢測。
e) 白細胞可能需要培養較長時間。
活力計算
細胞活力*（％）=[A(加藥)-A（空白）]/[A（0加藥）-A（空白）] ×100
A（加藥）：具有細胞、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A（空白）：具有培養基和CCK-8溶液而沒有細胞的孔的吸光度
A（0加藥）：具有細胞、CCK-8溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度
*細胞活力：細胞增殖活力或細胞毒性活力