6、定量
（1）浸泡
將膜片上的各蛋白質分離區帶分段剪下，分別置于相應的標有編號的試管內，然后各加入0.4mol/L的氫氧化鈉溶液進行浸泡。浸泡淡色帶所加入的0.4mol/L氫氧化鈉溶液的量為4ml，深色帶為8ml（此時的稀釋倍數是淡色帶的2倍）。室溫下的浸泡時間為
30min～60min。若在37℃水浴中浸泡，則為10min～15min。浸泡期間振蕩數次，使蛋白質區帶浸出。另外再剪取與色帶膜條大小相同的無色帶膜條作為空白，以相同的方式浸泡在0.4mol/L氫氧化鈉溶液中。
（2）比色 浸泡完畢，將浸出的有色溶液在分光光度計上進行比色測定。測定波長為620nm，光徑為1cm。若浸出液有混濁或沉淀，則以4000r/min的轉速離心10min～20min除去，然后再取上清液進行比色測定。
（3）計算 比色測定結束后，各組分的含量按下式計算：
某蛋白質組分百分含量＝某蛋白質組分的光吸收值/樣品中各蛋白質組分的光吸收值總和×100％
上式中深色帶蛋白質組分的光吸收值應乘以稀釋倍數2，例如血清白蛋白組分的分離區帶為深色帶，浸泡時所加入的0.4mol/L氫氧化鈉的量是其它淡色帶的2倍，所以應乘以2。
[方法評估]
1、醋酸纖維素薄膜與濾紙相比較，有以下優點
（1）醋酸纖維素薄膜對蛋白質樣品吸附極少，無“拖尾”現象，染色后背景能完全脫色，各種蛋白質染色帶分離清晰，因而提高了測定的精確性。
（2）快速省時。由于醋酸纖維素薄膜親水性較濾紙小，薄膜中所容納的緩沖液也較少，電滲作用小，電泳時大部分電流是由樣品傳導的，所以分離速度快，電泳時間短，一般電泳45—60min即可，加上染色，脫色，整個電泳完成僅需90min左右。
（3）靈敏度高，樣品用量少。 血清蛋白僅需2μl血清，甚至加樣體積少至0.1μl，僅含5μg蛋白樣品也可得到清晰的分離帶。臨床醫學檢驗利用這一點，檢測在病理情況下微量異常蛋白的改變。
（4）應用面廣。某些蛋白在紙上電泳不易分離，如胎兒甲種球蛋白，溶菌酶，胰島素，組蛋白等用醋酸纖維薄膜電泳能較好地分離。
（5）醋酸纖維素薄膜電泳染色后，經冰乙酸，乙醇混合液或其它溶液浸泡后可制成透明的干板，有利于掃描定量及長期保存。
2、醋酸纖維素薄膜電泳與聚丙烯酰胺凝膠電泳相比，操作簡單，但分離效果不太好。如血清蛋白在醋酸纖維素薄膜電泳中，只能分離出5—6條區帶，而聚丙烯酰胺凝膠電泳可分離出數10條區帶。
[應用意義]
由于醋酸纖維素薄膜電泳操作簡單、快速、廉價。目前已廣泛用于檢測血漿蛋白、脂蛋白、糖蛋白、胎兒甲種球蛋白、體液、脊髓液、脫氫酶、多肽、核酸及其他生物大分子，為心血管疾病，肝硬化及某些癌癥鑒別診斷提供了可靠的依據，因而成為醫學和臨床檢驗的常規技術。
[注意事項]
1、醋酸纖維素薄膜的預處理
市售醋酸纖維素薄膜均為干膜片，薄膜的浸潤與選膜是電泳成敗的重要關鍵之一。將干膜片漂浮于電極緩沖液表面，其目的是選擇膜片厚薄及均勻度，如漂浮15s—30s時，膜片吸水不均勻，則有白斑點或條紋，這提示膜片厚薄不勻，應舍去不用，以免造成電泳后區帶扭曲，界線不清，背景脫色困難，結果難以重復。由于醋酸纖維薄膜親水性比紙小，浸泡30min以上是保證膜片上有一定量的緩沖液，并使其恢復到原來多孔的網狀結構。最好是讓漂浮于緩沖液的薄膜吸滿緩沖液后自然下沉，這樣可將膜片上聚集的小氣泡趕著走。點樣時，應將膜片表面多余的緩沖液用濾紙吸去，以免緩沖液太多引起樣品擴散。但也不能吸得太干，太干則樣品不易進入薄膜的網孔內，而造成電泳起始點參差不齊，影響分離效果。吸水量以不干不濕為宜。為防止指紋感染，取膜時，應戴指套或用鑷子。
2、緩沖液的選擇
醋酸纖維素薄膜電泳常選用pH8.6巴比妥溶液，其濃度為0.05mol/L—0.09mol/L。選擇何種濃度與樣品及薄膜的薄厚有關。選擇時，先初步定下某一濃度，如電泳槽兩極之間的膜長度為8
cm—
10cm，則需電壓25V/cm膜長，電流強度為0.4mA/cm—0.5mA/cm膜寬。當電泳達不到或超過這個值時，則應增加緩沖液濃度或進行稀釋。緩沖液濃度過低，則區帶泳動速度快，并由于擴散變寬；緩沖液濃度過高，則區帶泳動速度慢，區帶分布過于集中不易分辨。
3、加樣量
加樣品的多少與電泳條件、樣品的性質、染色方法與檢測手段靈敏度密切相關。作為一般原則，檢測方法越靈敏，加樣量則越少，對分離更有利。如加樣量過大，則電泳后區帶分離不清楚，甚至互相干擾，染色也較費時。如電泳后用洗脫法定量時，每厘米加樣線上需加樣品0.1μl—0.5μl約相當于5μg—1000μg蛋白。血清蛋白常規電泳分離時，每厘米加樣線加樣量不超過1μl，相當于60μg—80μg的蛋白質。但糖蛋白和脂蛋白電泳時，加樣量則應多些。對每種樣品加樣量均應先作預實驗加以選擇。
點樣好壞是獲得理想圖譜的重要環節之一，以印章法加樣時，動作應輕、穩，用力不能太重，以免將薄膜弄壞或印出凹陷而影響電泳區帶分離效果。
4、電量的選擇
電泳過程應選擇合適的電流強度，一般電流強度為0.4mA/cm—0.5mA/cm寬膜為宜。電流強度高，尤其在溫度較高的環境中，可引起蛋白質變性或由于熱效應引起緩沖液中水分蒸發，使緩沖液濃度增加，造成膜片干涸。電流過低，則樣品泳動速度慢且易擴散。
5、染色液的選擇
對醋酸纖維素薄膜電泳后染色應根據樣品的特點加以選擇。其原則是染料對被分離樣品有較強的著色力，背景易脫色；應盡量采用水溶性染料，不宜選擇醇溶性染料，以免引起醋酸纖維素膜溶解。
應控制染色時間。時間長，薄膜底色深不易脫去；時間短，著色淺不宜區分，或造成條帶染色不均，必要時可進行復染。
6、透明及保存
透明液應臨用前配制，以免冰乙酸及乙醇揮發影響透明效果。這些試劑最好選用分析純。透明前，薄膜應完全干燥。透明時間應掌握好，如在透明乙液中浸泡時間太長則薄膜溶解，太短則透明度不佳。
透明后的薄膜完全干燥后才浸入石蠟中，使薄膜軟化。如有水，則液體石蠟不易浸入，薄膜不易平展。