實驗方法原理
實驗材料 樣品
試劑、試劑盒 預冷三氯乙酸乙醇乙醚
儀器、耗材 Whatman GF-C玻璃纖維膜多功能真空儀(Fisher)20 ml 閃爍瓶閃爍計數器
實驗步驟
1. 加入 20 μl 預冷的 10% TCA 停止反應,充分混勻,冰浴 10 min 以沉淀蛋白質。
2. 將樣品點在真空儀中的 Whatman GF-C 玻璃纖維膜上,待樣品通過膜后用 500 μl 預冷的 5% TCA 洗樣品管,并將洗后的液體也點在膜上。
3. 用 5 ml 5% 的預冷 TCA 溶液洗膜 4 次,用 10 ml 95% 的乙醇洗一次,再用 10 ml 乙醚洗 3 次,使膜干燥。
4. 將干燥后的膜放入 20 ml 閃爍瓶,在閃爍計數器中用契侖科夫(Cerenkov)射線計數。
注意事項
1. 乙醚是易燃品,因此帶乙醚操作時必須在通風櫥中進行,并遠離火源和熱源。乙醚洗液應被妥善處理。
2. 如果需對每分鐘蛻變次數(dpm)定量,將干燥后的膜放入10 ml 的閃爍液中計數。
3. 膜用 95% 乙醇清洗后可直接用于 Cerenkov 射線計數。假如用此膜進行閃爍計數,乙醚的清洗很重要,因為TCA(可被乙醚洗掉)在閃爍液中可導致強的化學發光,使計數失去意義。