1. 將10 ml 經CNBr活化Sepharose 4B溶脹于1 mmol/l HCl中，然后轉移至玻璃沙漏斗中，并用：①200~500 的1 mmol/l HCl和②200~500 ml 偶聯緩沖液各連續洗滌不少于30 min。 2. 將Sepharose凝膠轉移至50 ml 錐形塑料離心管中，加50~100 mg 的配體，混勻后4℃靜置過夜。
3. 250 g 離心10 min，棄上清，加偶聯緩沖液至滿管，離心，棄上清。
4. 加20~40 ml 1 mol/l pH8.0的乙醇胺，4℃靜置4~5 h，離心，棄上清。在管中依次加滿PBS和洗滌緩沖液來洗洗滌Sepharose，每次洗完后即離心。
5. 將Sepharose轉移到一個2.5 cm 的玻璃柱中，用100 ml 的PBS平衡。腹水液稀釋于3倍體積的PBS后上柱，流速為1~5 ml/min，在室溫下操作。
6. 用30 ml 的PBS從柱子上洗去未結合的蛋白，然后用甘氨酸·Cl緩沖液將結合蛋白洗脫下來（見基本方案）。
7. 執行基本方案的步驟5的操作。
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