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  • 發布時間:2020-03-31 18:43 原文鏈接: dmso滅菌

      1、培養室實驗準備工作大致同細胞傳代培養的前6個步驟。簡言之:用紫外消毒等消毒超凈工作臺面;清洗消毒手部;觀察細胞;預熱培養用液;點燃酒精燈;取出巴斯德吸管、刻度吸管等插在無菌試管內。

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      2、凍存液的配置:按如下比例配置:10%甘油+90%培養基,或者10%DMSO+90%培養基。用于配制凍存液的培養基中小牛血清濃度適量提高至20%或更高。所用的甘油需事先高壓滅菌,如使用DMSO,則不需要任何滅菌措施。

      3、取待凍存的細胞用胰蛋白酶消化(方法見細胞的傳代部分)。用含血清的培養基將細胞沖洗下來,將細胞懸液吸到無菌離心管中,800r/min離心5min,棄上清,收集細胞沉淀。如果是懸浮生長的細胞,則可直接離心收集細胞。

      4、在沉淀中加入適量凍存液制成細胞懸液,細胞濃度宜大,300萬/mL左右,一般一個中方瓶中的細胞濃縮至1mL,凍存液中為宜。

      5、細胞懸液裝入凍存管中。用封口膜封裹瓶口,做好標記。

      6、凍存管在4℃下存放30min,轉放-20℃中30min,再轉入-70℃過夜,之后即可放入液氮中長久保存,注意進行登記。


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