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  • 發布時間:2008-06-17 16:25 原文鏈接: 服務項目:微量測序的SDSPAGE電轉印方法

    微量測序的SDS-PAGE電轉印方法

    材料
    PVDF膜(polyvinylidene difluoride), 美國ABI 公司  CAPS[3-(cyclohexylamino)-1-propane sulfonic acids], SIGMA  實驗所用的各種溶劑和試劑均為分析純或色譜純。   

    1. 電泳  100pmol的蛋白樣品上樣于SDS-PAGE上,用15%分離膠和5%濃縮 13mA下電泳4小時。 

    2. 電轉印  電泳后將凝膠浸泡在10mMCAPS緩沖液中, 以漂洗去表面的Tris 和Gly。將在CAPS緩沖液中浸泡過的多層濾紙與膠、PVDF膜做成“夾 心”, 置于半干轉印儀中, 在1.6mA/cm2下轉印1小時、取出PVDF膜,  用水漂洗后, 用0.1%考馬斯亮藍R-250染色1分鐘, 50%甲醇溶液脫色約5~10分鐘, 可見蛋白條帶, 蒸餾水洗滌后, 在空氣中干燥,-20°C保存備用。
     
       
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