高效液相色譜在食品安全分析中的應用

　　摘要:目前，高效液相色譜法（HPLC）作為化學分離分析的一種重要手段得到廣泛應用。綜述了高效液相色譜技術在食品中的農獸藥成分殘留、添加劑、霉菌毒素及其他食品營養成分分析中的應用。 
　　民以食為天，食以安為先。溫飽問題得以解決、物質文明極大豐富的今天，食品質量安全問題已然成為全社會關注的熱點。中國人口多，環境保護意識差，生存環境及質量不高；水源污染導致食源性疾患的發生；水質污染直接影響海產品的衛生質量；農畜業種植、養殖源頭污染對食品安全的威脅越來越嚴重；農藥、獸藥濫用，造成食物中農獸藥殘留問題突出；食品中添加不符合食品衛生要求的物質而引起的食物中毒等事件屢有發生。這就需要有一套完整的監測監督機制，建立快速調查食源性疾病和監測食品污染的措施和方法。本文就高效液相色譜（HPLC）技術在食品安全分析中的應用概況作一綜述。 
　　高效液相色譜法（High Performance Liquid Chromatography）是在經典液相色譜法的基礎上，于20世紀60年代后期引入了氣相色譜理論而迅速發展起來的一種新型分離分析技術。它與經典液相色譜法的區別是填料顆粒小而均勻，小顆粒具有高柱效，但會引起高阻力，需要高壓輸送流動相，故又稱高壓液相色譜法（High Pressure Liquid Chromatography），又因為分離速度快又稱為高速液相色譜法（High Speed Liquid Chromatography）、也稱現代液相色譜。高的分離效能源于色譜系統中流動相、固定相與組分間的協同作用[1]，采用高壓輸液泵、高效固定相和高靈敏度的檢測器，因而具有高效性、高靈敏度、操作自動化等特點。 
　　一、HPLC在農獸藥殘留檢測中的應用 
　　隨著生活水平的提高，健康食品已經成為人們關心的重點。分析食品中農獸藥殘留十分重要，HPLC是分離分析熱不穩定和難揮發性化合物的有效方法。 
　　早在20世紀90年代初，楊蓉[2]等闡述了應用高效液相色譜對食物及生物樣品中呋喃丹、氯菊酯、溴氰菊酯、抗蚜威及雙甲脒五種農藥殘留進行分離測定的研究。 
　　吳平谷[3]等建立了雞肉中十種磺胺類藥物殘留的高效液相色譜紫外檢測（HPLC-UV）分析方法。采用C18柱，甲醇―水/甲醇―甲酸為流動相梯度洗脫，雞肉樣品經過甲醇提取，正己烷脫脂，SLW固相萃取柱凈化，用HPLC法測定雞肉中十 種磺胺類藥物的含量。結果表明，當雞肉樣品添加十種磺胺類藥物為0.05 ～0.2 mg/kg時，方法回收率為67.4%～95.6% ，變異系數為4.8%～11.5% ，十種磺胺類藥物最低檢出濃度為0.01 mg/g。 
　　柳菡[4]等建立了以反相高效液相色譜―電噴霧串聯質譜（LC - ESIMS/MS） 同時測定蔬菜中26種農藥殘留量的檢測方法。蔬菜樣品經含0.1%醋酸的乙腈提取、濃縮、分散型固相萃取凈化后采用C18柱分離，以0.2mmol/L醋酸銨水溶液―甲醇為流動相，梯度洗脫。結果表明，二十六種農藥在5.0～200μg/L范圍內線性關系良好（ r2 > 0.997） 。在豌豆、菠菜、脫水蔥三種基質中的檢出限和定量下限均為2.0μg/kg和5.0μg/kg。在5.0、10.0、40.0μg/kg 三個添加水平下，二十六種農藥的回收率為70%～110% ，精密度（RSD）小于15%。 
　　二、HPLC在食品添加劑檢測中的應用 
　　食品添加劑是在食品生產加工過程中，為改善食品色、香、味等品質，以及為防腐和加工工藝的需要，而加入食品中的少量的化學合成或者天然物質。主要分為乳化劑、防腐劑、甜味劑、消泡劑、增味劑、發色劑、抗氧化劑、天然或人工合成色素、漂白劑、增稠劑、香精香料等。食品添加劑的安全使用是非常重要的。理想的食品添加劑最好是有益無害的物質。食品添加劑，特別是化學合成的食品添加劑大都有一定的毒性，因此，測定食品中各種添加劑的含量以控制其使用量，對保證食品安全質量，保障人民健康具有十分重要的意義。 
　　李敬慈、丁天惠[5]采用乙二胺作為硅膠柱改善劑的高效液相色譜法測定了奶制品和淀粉水解液中糖的含量。對樣品處理方法及色譜條件作了探討，采用Pb（Ac）2-Na2C2O4-K2HPO4處理樣品，含0.01%乙二胺的乙腈―水（65:35，V/V）作流動相，示差折光檢測器檢測。本方法操作簡單、價廉、準確。HPLC用于糖的定性和定量分析具有快速、靈敏、樣品處理簡單等優點[6]。 
　　余濤[7]等采用 ODS C18柱，甲醇―乙酸銨作為流動相，針對不同類型樣品 ，采用不同前處理方法 ，樣品處理液最后于液相色譜儀進行分析定量。結果:乙酰磺胺酸鉀、 苯甲酸、 山梨酸、 糖精鈉、 脫氫乙酸、 阿斯巴甜在 0～0.32 mg/ml濃度范圍內 ，標準曲線線性關系良好，RSD為 0.67%～6.8%；乙酰磺胺酸鉀加標回收率為 93.1% ～99.6%、 苯甲酸為 90.5% ～98.7%、 山梨酸為 91.5% ～102.5%、 糖精鈉為 91.8%～100.9%、 脫氫乙酸為 92.3%～99.8%、 阿斯巴甜為 90.3%～103.5%。 
　　三、HPLC在霉菌毒素檢測中的應用 
　　食品中存在多種霉菌毒素，其中黃曲毒素是生活中最為常見的一種毒素，它是食品貯存時由真菌產生的毒素，有強烈的致癌作用。 
　　趙寧[8]等采用高效液相色譜法，使用Agilent1100色譜柱；在柱溫30℃；乙腈―甲醇―水（1∶1∶2）為流動相；流速為1.0ml/min；熒光檢測器；測出黃曲霉素在花生中的含量，方法重復性的RSD為0.38%，平均回收率為78.4%。 
　　王峰瑩[9]采用甲醇水溶液提取糧食中的黃曲霉毒素，提取液經過過濾、稀釋后，用免疫親和柱凈化，以甲醇為流動相洗脫，用高效液相色譜法直接測定。方法重復性的RSD為1.5%，平均回收率為90%～105%。 
　　四、HPLC在其他食品檢測中的應用 
　　HPLC不僅用于上述農藥殘留、霉菌毒素、食品添加劑等的檢測，用于食品中營養成分的分析，還可用于食用藥材指紋圖譜的檢測。 
　　閻正等建立了丹參藥材[10]、鹿茸[11]、人參[12]等高效液相指紋圖譜，研究了不同的預處理方法、流動相組成、最佳檢測波長等操作因素對指紋圖譜的影響。 
　　馮麗娟[13] 等建立了食品中可能出現的罌粟殼生物堿成分――嗎啡、 可待因、 罌粟堿的提取和測定方法 ，用超聲―微波協同萃取的方法提取罌粟殼中的生物堿 ，高效液相色譜法（HPLC）進行含量分析.其平均回收率分別為 97.87 % 、96.80%、94.47%；精密度相對標準偏差（RSD）分別為 0.070%、0.037%、0.029%；重現性相對標準偏差（RSD）分別為 0.040%、0.209%、0.665%。 
　　彭錦峰 [14] 建立了用高效液相色譜測定食用香菇中甲醛的方法。劉云惠[15] 等建立了高效液相色譜對玉米大斑病菌毒素的分離方法。 
　　五、小結 
　　HPLC作為一種十分有效的分析分離手段，已經越來越廣泛地應用到食品檢測與安全性分析中，近年又與其他的色譜、質譜、光譜、核磁等相互結合，擴大了檢測范圍，提高了分析水平，尤其對食品中殘留的微量、痕量有毒有害物質能快速準確地分析出來，進一步提高了食品衛生質量，保障了食品安全和人民身體健康，促進了食品出口。隨著高效液相色譜分析技術的不斷完善和發展，HPLC必將在食品檢測與分析領域有更廣闊的發展。 

　　參考文獻： 
　　[1]龐秀言，孫漢文，申世剛.液相色譜流動系統的流體動力學研究[J].河北大學學報:自然科學版，2004，(5). 
　　[2]楊蓉，傅承光.高效液相色譜對痕量農藥殘留分析的研究及其應用[J].河北大學學報:自然科學版，1993，(3):101-108. 
　　[3]吳平谷，馮靚，等.固相萃取結合高效液相色譜測定雞肉中十種磺胺類藥物殘留[J].中國衛生檢驗雜志，2008，(11). 
　　[4]柳菡，徐錦忠，等.蔬菜中二十六種農藥殘留的高效液相色譜―串聯質譜法測定[J].分析測試學報，2009，(2):181-185. 
　　[5]李敬慈，丁天惠.高效液相色譜法測定奶制品和淀粉水解液中的糖[J].河北大學學報:自然科科學版，1996，(3):72-75. 
　　[6]李敬慈.高效液相色譜法測糖[J].河北大學學報:自然科學版，1997，(4):87-92. 
　　[7]余濤，葉堅，劉昶.高效液相色譜同時測定食品中多種甜味劑和防腐劑的研究[J].中國衛生檢驗雜志，2008，(10). 
　　[8]趙寧，郭玉梅，姚妍妍，許佳.高效液相色譜法測定花生中黃曲霉素的含量[J].科技信息，2009，(25):43-45. 
　　[9]王峰瑩.糧油食品中黃曲霉毒素含量的測定[J].2001，(4):67-70. 
　　[10]閻正，閻海榮，等.丹參藥材的HPLC指紋圖譜[J].河北大學學報:自然科學版，2008，(1):69-73. 
　　[11]閻正，苑若瑤，等.人參HPLC指紋圖譜的研究[J].河北大學學報:自然科學版，2009，(3):278-283. 
　　[12]閻正，于趁，等.鹿茸的HPLC指紋圖譜[J].河北大學學報:自然科學版，2010，(2):164-170. 
　　[13]馮麗娟，王庭欣，趙志磊，等.超聲―微波協同萃取―HPLC檢測摻罌粟殼肉湯中的生物堿[J].河北大學學報:自然科學版，2009，(3):291-294. 
　　[14]彭錦峰，劉景富，呂愛華，等.HPLC 法測定食用香菇中的甲醛[J].分析試驗室，2005，(4):5-57. 
　　[15]劉云惠，張利輝，董金皋.高效液相色譜對玉米大斑病菌毒素的分離與制備[J].河北大學學報:自然科學版，2005，(5).