1、甘露聚糖酶液
菌種采用芽孢桿菌WY-45,為本實驗室保存。培養基成分(質量濃度,g/l):魔芋精粉20,牛肉蛋白胨8,酵母提取物4,KH2P04 1,MgS04·7H20 0.5;自然pH值。每250ml三角瓶40ml培養基,50℃,200r/min,發酵96h后,離心去菌體所得上清液即為粗酶液。酶活測定采用DNS法,底物溶液為0.5%的槐豆膠(pH6.5,0.05mol/L磷酸鹽緩沖液配制),50℃水浴中反應10min。酶活測定為1100U/ml,4℃冷藏備用。
2、甘露聚糖酶解
取50.0g椰子殼甘露聚糖,加入1L去離子水,煮沸5min,冷卻至室溫后用0.1mol/L鹽酸調節pn值至6.0,加入25ml粗酶液(共含27500U甘露聚糖酶活),50℃,150r/min,水解24h。用0.1mol/L鹽酸或NaOH溶液使系統pH值穩定在5.8~6.2。水解結束后沸水浴10min滅酶終止反應。酶解液過濾,濾餅用少量水洗,合并濾液。濾液50℃真空濃縮至約300ml。
3、分離和結晶
將活性炭柱用去離子水流速以105ml/h平衡12h后,取含糖量為16.2g的糖液定容至200ml,流速以105ml/h上樣。上樣結束后,開始進行程序洗脫,洗脫速度為105ml/h,洗脫程序為去離子水水洗約2L以洗凈單糖和鹽分后,5%~30%乙醇溶液(總體積8L)線性洗脫。洗脫液全部用自動部分收集器收集,1瓶/h。測定所收集樣品的總糖含量,并TLC檢測糖組成。合并含同一單組分的收集液55℃真空濃縮至過飽和糖漿之后,加入稍許相應的低聚甘露糖的晶種,室溫靜置,等待結晶。