與色譜柱相關的問題匯總（五）

  41.UPLC色譜柱可以反沖嗎?HPLC的色譜柱可以簡單反沖，但是，UPLC的色譜柱.也是一樣的嗎?如果壓力偏高，該怎么辦?

　　答：如果兩端篩板孔徑對稱，UPLC柱應該也是可以反沖的。發現壓力偏高，當然也可以用反沖清洗的方法維護，UPLC柱和普通色譜柱比，只是壓力高一點，不應該有什么特殊吧。

　　42.常規LC的柱子粒度小，柱效高，現在有3.5μm的常規柱，不知道用3.5μm*250的壓力與4.6μm的壓力相差多少?

　　答：一般柱子4.6mm×250mm指的是其內徑和長度。粒徑才用μm的單位，但一般標的是5μm，也有3.5μm的。其它條件一樣，光粒徑是3.5μm和5μm的柱壓差別，理論上3.5μm柱子的柱壓是5μm柱子的(5/3.5)平方倍數，即，2.04倍，簡單說就是2倍。

　　43.因為，不知道流動相已走完，液相色譜柱空走了大概一晚上，請問這種情況下柱子還能用嗎?如果可以應該如何再生?

　　答：能用的!可能柱子里會有氣泡進去，但之后，多用流動相沖沖，看到基線穩定，就沒問題了。用色譜柱的保存液低流速長時間沖洗，然后，再檢測一下柱效，看柱子是否恢復，液相最好設置一下最低壓限，這樣就不怕流動相走光而會損傷色譜柱。

　　44.在梯度洗脫的時候，如果整個時間程序越長，保留時間的重現性越差，尤其是后出的峰重現性差更明顯，我猜估計是流量本身的誤差引起的，但是怎么盡量避免這種情況的出現，使保留時間重現性更好?

　　答：這個要控制好環境溫度和柱溫，易揮發的流動相要適當密封，同時，保留時間的漂移與儀器的精度也有關系。

　　45.我對聚苯乙烯-二乙烯苯柱很有興趣，主要是它耐高溫、耐酸堿、但有關這方面的文獻很少，但對于他的分離效能我一直心里沒底，我的問題有三：

　　1.分離效果與ODS比較，是相當呢，還是更勝一籌，或是更差?

　　2.我原以為它是整體住，但看過資料后發現也是顆粒的比如，5μ，請問該類型的柱是否符合速率理論、是不是粒徑越小分離效果會幾何級的增加?

　　3.問什么沒有1.7μ的這種柱出現呢?

　　答：聚合物基質色譜柱的優點你已經提到了，它的缺點有：對小分子分離的柱效相對硅膠基質色譜柱要低，表面衍生化修飾也沒有在硅膠表面豐富，機械強度低耐壓性不好，還有碰到某些有機溶劑會溶脹等。。。

　　聚合物基質柱當然也符合速率理論!它柱效低主要是因為，分析物在聚合物固定相中的傳質速度比在硅膠表面固定相中慢很多。不過粒徑越小柱效幾何級增加的規律還是有的。1.7μm的硅膠基質填料也是最近幾年才商品化，1.7μm的聚合物基質沒出來也正常，或許永遠都不出來了，因為，聚合物耐壓差，粒徑做這么小，它根本承受不了這個高壓吧，但愿以后會有能抗高壓的聚合物填料研究出來。

　　46.我之前有了解到貴公司也有手性色譜柱，之前買過大賽璐的手性柱，其手性柱價格相比普通反相色譜柱，要高出很多倍，不知道是本身柱子裝填技術的難度大還是其他什么原因?它的主要技術關鍵在什么方面?

　　答：手性柱技術關鍵在于手性填料的開發，大賽璐公司在手性填料的生產技術方面申請了ZL保護，別的廠商不能生產，導致手性柱價格居高不下。前幾年傳說該公司的ZL保護期限快到了，國際國內有些公司就想著仿制生產。后來又聽說ZL還沒到期，情況不明。

　　47.“樣品與離子對生成緊密的結合物，離子對試劑掩藏化合物中的極性基團”這句話是什么意思?離子對怎么樣掩蔽化合物中極性基團?不就是通過靜電引力的作用形成離子締合物，來降低其極性的嗎?

　　答：離子對色譜是解決強極性物質在反相色譜中保留能力不足的一個有效的途徑。有些堿性極性物質，即使用100%水相做流動相，且無論在色譜柱能承受的pH范圍內怎么去調節pH，保留能力都不夠。如果需要分離的組分中全是可以離子態存在的，那還可以選擇離子交換色譜進行分離。不然的話，就只有選擇離子對色譜方法了，盡管它有流傳的那么多副作用存在。

　　離子對試劑含親水基和疏水基，很像表面活性劑，所以一開始離子對色譜也稱為“皂色譜”。離子對作用的機理有兩種解釋，你上面都已經提到了。到底是哪種解釋對，尚無定論，實際上也沒必要去定論，反正兩種解釋都通就可以了。主流的解釋也是你先提到的機理，下面示意圖更直觀：

　　我個人認為，兩種機理都可能存在，要看離子對試劑、固定相和分析物這三者本身情況而定。如果離子對試劑的疏水端和固定相之間的結合力相對更強，示意圖的作用機理會占上風。反之，離子對試劑親水端和分析物導致掩藏極性端的作用力更強，你后面提到的機理更可能。總之，要看你用的什么離子對試劑，是何種的分析物等具體情況不同而不同吧。

　　48.我們在用的氨基柱時，有時候峰型突然變寬，有拖尾，用一段時間就又好了，不明白是什么原因造成的，如果要再生氨基柱的時候應該怎么做呢?是像您先前回答的問題中提到的，用一定比例的氨水沖洗嗎?氨基柱可以直接用純水沖洗嗎?記得當時買的氨基柱那個使用說明書上說不能用純水沖?是這樣的嗎?如果可以沖的話，一般沖多久?

　　答：氨基柱的硅膠孔內的氨基濃度非常高(大約有1mol/L)，在有水存在的時候，在孔內形成一個pH=10左右甚至超過10的很強的堿性小環境，并會導致硅膠基體慢慢溶解。不過硅膠基體的溶解會生成酸性的硅醇基，又會降低孔內的pH值，延緩硅膠基體的溶解進程。一段時間后，兩個相反的過程會達成一個動態平衡，從而穩定下來。對你問題提到的這個現象，我想到的是這個原因。

　　氨基柱，要看氨基柱的應用模式，是正相還是HILIC?這兩種模式的情況是大不相同的。正相使用，一般很怕有水，但HILIC模式應用，一般流動相是乙腈/水，是不怕水的。不過，鍵合氨丙基基團非常容易水解，所以一般氨基柱不適宜保存有水的溶劑中。作為正相應用時，流動相中要求一點都不能含水，但清洗柱子上的污染物質，是可以含水的，因為，水有強極性，在正相色譜上洗脫能力極強，當然不必用100%純水。氨基柱具體沖洗方法，正相條件按照正相硅膠柱的清洗方法，HILIC模式按C18柱的清洗方法。

　　49.采用國標用C18柱測定辣椒精辣度，將辣椒精中添加吐溫系列乳化劑做成水溶辣椒精，請問乳化劑對C18柱是否有影響?

　　答：乳化劑和離子對試劑類似，有極性端和非極性端，肯定會對C18柱有影響。不過，如果辣椒精是極性物質，乳化劑的存在可以提高其在C18柱上的保留能力。

　　50.公司按照國標測定辣椒紅色素中蘇丹紅含量，標品分離很好，峰也不錯，但是，辣椒紅色素由于跟蘇丹紅性質很相似，且顏色較深，分離效果很差，收得率很低，測定結果偏差很大。該如何處理樣品?色素是否會降低柱效?

　　答：色素不會降低柱效，但，辣椒紅色素主峰濃度過大，會影響與臨近雜質峰的分離。可考慮稀釋樣品或試試用柱效更高的柱子。