一、凝膠染色1.電泳結束后,將凝膠置于盛有試劑 A 的微波爐專用塑料容器中,試劑 A 的量要足夠覆蓋整塊凝膠。例如,一塊典型的 mini 膠(8 cmX10 cm 或 8 cmX8 cm) 需用 IOOml 的試劑 A。 2.用微波爐的最大功率加熱凝膠直至溶液沸騰(約需 2 min)。 3.室溫輕輕搖動凝膠,使之冷卻 5 min。 4.棄去用過的試劑 A,用水快速地沖洗一下凝膠。這時,即使在藍色的背景下也可以看到蛋白含量在 IOOng 以上的蛋白條帶顯現出來。 5.加入 IOOml 試劑 B,用微波爐的最大功率加熱凝膠直至溶液沸騰(約需 80s)。 6.棄去熱試劑 B,用水沖洗凝膠。此步完成后可見蛋白含量在 50 ng 以上的條帶。 7.加入 IOOml 試劑 C,并用微波爐的最大功率加熱凝膠直至溶液沸騰(約需 80s)。 8.棄去熱試劑 C,用水沖洗凝膠。這樣,蛋白含量在 25ng 以上的蛋白條帶可顯現。 二、凝膠脫色9.加入 IOOml 試劑 D,并用微波爐的最大功率加熱凝膠直至溶液沸騰(約需 80s)。 10.在溶液中放人 Kimwipe 紙巾,吸取多余染料。 11.室溫冷卻凝膠 5 min。此時,蛋白含量大于 5ng 的條帶也能顯現。 12.重復步驟9~10 兩次以上,或將凝膠放在試劑 D 中于室溫搖動 15 min 以上。 這時,某些僅含有 2.5ng 蛋白的條帶也能顯現。 展開 |