Elisa生物檢測是一種敏感度高,同時特異性強,重復性好的實驗檢測方法,由于其試劑穩定、易保存,操作簡便,結果判斷較客觀等因素,已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。
目前市面上的Elisa試劑盒檢測原理主要有以下四種:直接法,間接法,夾心法,競爭法。
四種Elisa檢測方法由于其檢測原理各有優劣:
優點 | 缺點 | |
直接法 | 1.操作簡便 | 1.一抗由于添加標簽免疫活性降低 |
間接法 | 1. 一抗的最大免疫反應性得以保留 | 1. 二級抗體可能發生交叉反應,產生非特異性信號 |
夾心法 | 1.特異性,靈敏度高 | 1.檢測時間,反應時間增加 |
競爭法 | 1. 通過觀察預期信號輸出中的干擾來測量樣本中抗原(或抗體)的濃度。 | 1.計算不太直觀 |
通常我們在選擇所需要的Elisa試劑盒時主要會從以下幾個方面進行選擇:
Elisa試劑盒選擇原則:
指標 | 選項 |
樣本類型 | 人,小鼠,大鼠 |
檢測指標的類別 | ·多表位的大蛋白:夾心ELISA |
檢測需求 | 定性或定量 |
靈敏度 | 低濃度的物質需選擇高靈敏度檢測方式 |
樣本體積 | 珍貴的樣本用少量的體積 |
回收率和線性 | ·靈敏度 |
檢測系統 | 比色法,熒光法,發光法 |
其他優勢 | 協議簡單,操作方便,實驗時間短 |
Elisa試劑盒質量到底怎樣?檢測結果的可信度高不高?
Elisa試劑盒評價標準:
① 準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值,應大于等于0.9900。
② 靈敏度:反應試劑盒的最低檢測濃度
③ 特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
④ 重復性:板內、板間變異系數
⑤ 回收率:判斷實驗的準確性和特異性
Elisa試劑盒的標準曲線:
標曲R值是幾個9才合格?
實驗室應按檢測標準(方法)的要求使用標準溶液或標準物質建立標準曲線。所用標準溶液或標準物質應覆蓋被測樣品的濃度范圍。檢測標準(方法)如無具體的要求,至少使用5個標樣(除空白外)建立線性標準曲線,每個點重復測定1-3次,對于篩選方法,線性回歸方程的相關系數不應低于0.98,對于確證方法,相關系數不應低于0.99。
其實,大于0.99是判斷是否為線性相關的一個標準,實際應用中線性大于0.999才是比較理想的。線性在0.99到0.999之間的監測結果只用接近最高濃度一半(中間濃度)的位置才比較準確,如果線性大于0.999的話,在整個線性范圍內都會有一個比較滿意的結果。
如果檢測的線性不好,可以減少標準的覆蓋范圍,將標準的濃度調整到待測樣品濃度附近,這樣結果也是非常準確的。例如,樣品的濃度約20ppb,但在0~50ppb范圍建立標準曲線,但線性非常不理想,這時可以將標準范圍調整到15~25ppb之間,作五個標準。
可以檢測檢測各類食品,飼料,組織及生物液體中真菌毒素、抗生素、食品添加劑以及其他細菌蛋白的ELISA試劑盒:
1.抗生素類:氨芐青霉素,E4350,樣本:血清,尿液,牛奶,組織
檢測食品中抗生素的殘留
樣本類型:組織、血清、牛奶、雞蛋和其他生物樣本
真菌毒素是真菌產生的低分子量次級代謝產物2.真菌毒素:總黃曲霉毒素,E4747,樣本:酒、醬油、醋、谷物、花生、
配方飼料、食用油
樣品類型:玉米、谷物、花生、大米、大豆等。
食品受到生物和環境污染物的污染發生在生產和加工的幾個階段3.食品添加劑: 沙丁胺醇,K4209,樣本:豬尿、組織、飼料
樣品類型:牛奶、肉類、玉米、谷物、花生、大米、大豆,等。
表達蛋白經過幾個純化步驟后,宿主細胞蛋白仍然可以以較高濃度存在,甚至會與原料藥一起純化和濃縮;樣品類型:細胞裂解液、其他生物液
4.宿主細胞蛋白:CHO 宿主細胞蛋白,E4537,樣本:細胞裂解液,其他生物液體
5.其他毒素:雙酚A(BPA),E4722,樣本:細胞裂解液,其他生物液體
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各有關單位:根據《中國食品科學技術學會團體標準工作管理辦法》等規定,我學會組織起草了《葡萄球菌腸毒素測定ELISA試劑盒法(征求意見稿)》團體標準。現公開征求意見,請于2023年8月11日前將相關意見......
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