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  • 發布時間:2021-06-29 09:34 原文鏈接: IVD免疫診斷原理一覽

    免疫診斷(immunodiagnosis)是應用免疫學的理論、技術和方法診斷各種疾病和測定免疫狀態。目前免疫診斷的平臺和方法有多種多樣,但是都基于相同或相似的原理。這里就整理免疫診斷的5大基本原理供大家回顧。

     

    1、雙抗體夾心

    原理:雙抗體夾心法是檢測抗原最常用的方法,雙抗體夾心法適用于測定擁有至少兩個表位的大分子抗原。不適用于測定半抗原及小分子單價抗原,不能形成兩位點夾心。


    應用場景:絕大多數檢測蛋白都可以使用雙抗體夾心法。有些抗體檢測項目,如總IgE檢測。

     

    注意事宜:1)在一步法,待測抗原與標記抗體一起加入反應中,當標本中受檢抗原的含量很高時,過量抗原會分別和固相包被抗體及標記抗體結合,不會形成“夾心復合物”就出現鉤狀效應,導至結果偏低或者甚至可出現假陰性結果。2)HAMA效應和類風濕因子(RF)的干擾。

     

    2、雙抗原夾心



    原理:雙抗原夾心法的反應模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進行包被和標記。

    有研究表明,雙抗原夾心法檢測抗體的靈敏度和準確性要抗體檢測使用的間接法(檢測抗體更為常用的一種方法)。

     

    應用場景:理論上,檢測抗體的項目均可使用,如乙肝表面蛋白抗體檢測。待檢抗體IgG的兩個Fab需要分別同固相包被抗原和標記抗原同時結合。

     

    注意事宜:抗原標記過程可能導至蛋白構象變化,需要尋找最適合的標記物和標記方法。

     

    3、間接法

    原理:間接法是檢測抗體常用的方法。其原理為利用標記的抗抗體,俗稱二抗,來檢測與固相包被抗原結合的受檢抗體。本法主要用于對病原體抗體的檢測而進行傳染病的診斷。

     

    應用場景:所有的IgG抗體檢測都可以使用。如新冠血清IgG檢測。

     

    注意事宜本方法的優點是只要變換包被抗原的種類就可利用同一標記抗抗體(二抗)建立檢測相應抗體的方法。

     

    4、競爭法


    原理:當小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個表位供包被和檢測抗體同時識別結合,因此不能用雙抗體夾心法進行測定,可以采用競爭法模式。由于物質的相互作用或者結合是相對動態平衡的過程,一旦樣本中存在待檢測物,樣品中的待檢測物會同試劑中的標記物去競爭結合包被物。這樣就是導至原來結合在一起的包被物和標記物分離,使原本飽滿的信號值進行降低。信號降低的程度同待檢測物的濃度成正相關。

     

    應用場景:小分子抗原或半抗原,如激素檢測,雌二醇,睪酮;甲狀腺功能檢測,T4,T3等。

     

    注意事宜:競爭法中,有些待檢測物分子特別小,很難制備或找到適合使用的抗體,而且生理條件下可以同其他蛋白結合,那么可以使用該分子的結合蛋白來代替抗體實現。如,25OH-Vd檢測,可使用25OH-Vd特異性抗體,也可使用Vd結合蛋白。

     

    5、捕獲法(反向間接法)


    原理:捕獲包被法,又稱為反向間接法,采用抗抗體(二抗)包被,抗原進行標記的檢測方法。以目前最常用的IgM測定為例,因血清中針對某種抗原的特異性IgM和IgG同時存在,則后者可干擾IgM的測定。因此先將所有血清IgM(包括異性IgM和非特異性IgM)固定在固相上,在去除IgG后再測定特異性IgM。

     

    應用場景:IgM測定最為常見,特定過敏原IgE檢測。


    注意事宜:IgM型類風濕因子(RF)的干擾,IgE型類風濕因子相對較少。


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