HPLC使用過程中常見問題及解決方法

　　1.保留時間重現性不好

　　保留時間不重現還會影響到峰面積的重現性，導致實驗無法進行。引起這種現象因素很多，建議檢查以下幾個方面：

　　 -確認流動相是新鮮配置的，比例沒有錯誤。

　　 -確認色譜柱是好的。

　　 -檢查一下溶劑瓶里的溶劑過濾器沒有長菌，沒有被堵塞。

　　 -如果您使用梯度洗脫方法，請確認平衡時間足夠長。

　　 -仔細觀察柱前壓得變化，如果壓力穩定，就可以判斷泵的系統沒有問題，請更換新的色譜柱試試。

　　 -如果是壓力不穩定，一定會影響保留時間。解決方法請參見第2條

　　2.柱前壓不穩定，壓力上下波動

　　引起這種故障最常見的原因是泵里有氣泡，建議用以下的方法排除。

　　-如果您的系統沒有配置脫氣機（二元泵），溶劑一定要經常超聲脫氣。

　　-脫氣機的效率不夠，特別是用甲醇/水的系統最容易發生。可以將A，B通道串聯；C，D通道串聯用來延長脫氣的時間，效果非常明顯。

　　-主動閥閥芯污染。 可以將閥芯取下，用甲醇超聲清洗。

　　3.排氣閥里的過濾經常芯堵塞

　　如果是排氣閥里的過濾芯堵塞引起的壓力升高，請仔細檢查一下換下來的過濾芯。正常情況下，一個過濾芯可以使用6個月左右，如果經常更換就有問題。

　　-如果過濾芯的顏色發黑，說明是被柱塞密封墊磨損下來的碎屑堵塞的，請確認流動相使用的緩沖鹽的濃度是否太高了，是否使用了柱塞清洗裝置。 緩沖液在泵頭內部析出的鹽的結晶會加速密封墊的磨損。

　　-如果過濾芯的顏色是乳白色的，非常干凈。說明過濾芯很有可能是被流動相污染了。 請檢查一下您是否使用了過期的溶劑（水，有機溶劑），或質量不好的溶劑。請馬上更換別的品牌的溶劑或使用純凈水（推薦：娃哈哈純凈水）。如果流動相經過了濾膜過濾，請確認是否使用了正確的，優質的濾膜。建議您先不要使用濾膜過濾流動相，看看是否可以解決過濾芯堵塞的問題。

　　-如果存放緩沖液或水的溶劑瓶不經常清洗，該通路會生長藻類，藻類會污染整個流路系統和脫氣機的腔體，藻類及其代謝產物也會堵塞過濾芯。如果發生了這種情況，建議用60度的熱水清洗溶劑瓶，并用異丙醇清洗整個管路和脫氣機。建議以后一定要用棕色瓶存放緩沖溶液，避光，并且定期清洗溶劑瓶。

　　4.峰面積或峰高重現性不好，偏差大

　　如果HPLC系統配有自動進樣器，這種情況主要是自動進樣器的問題。

　　-首先確認柱前壓是穩定的，保留時間的重現性好（參見第1，2條）

　　-將自動進樣器的抽樣速度降低到50ul/min以下 (默認值是200ul/min).您的樣品有可能粘度較大，降低抽樣速度可以極大地改善粘度較大的樣品的進樣精度。

　　-如果進樣針或針座有輕微的堵塞，對進樣精度的影響也非常大。請參考第 5條的處理辦法。

　　-如果是手動進樣器，請確認一定要使用Agilent配的標準進樣針，且進樣器的廢液出口要與進樣口水平，避免虹吸的影響。如果是滿Loop進樣，建議注射5倍Loop的進樣體積。

　　5.自動進樣器的針頭或針座經常堵塞，如何處理？

　　-如果針頭或針座經常堵塞，請檢查您所使用的進樣瓶隔墊。質量不好和已經破損的隔墊易產生很多碎屑。進樣時，這些細小的碎屑很容易將針頭，針座堵塞。使用Agilent的正規隔墊并且經常更換舊的隔墊就可以避免這類問題。

　　-如果您的樣品經過離心處理，用針頭吸取上清液進樣, 請將針頭進樣位置提高。

　　-如果針頭或針座發生了堵塞，可以用以下簡單的辦法處理：通過Chemstation診斷界面的更換針頭，針座的程序將其取下，反接到泵的出口，用反吹的辦法將其疏通。 大部分是可以順利解決的。

　　6.紫外檢測器（DAD，VWD）信號波動大，噪音大，光強度檢測通不過，如何處理？

　　引起這種問題的因素很多，要一步一步排除，直到找到問題真正原因。

　　-確定柱前壓穩定；溶劑（高純度的有機溶劑， 水）使用正確，流動相脫氣良好（請參考第2條）；

　　-檢查檢測器的氘燈是否已經到了使用壽命，是否更換過新的氘燈。

　　-用異丙醇清洗整個系統，更換過濾芯，排除污染源。

　　-清洗流動池和有關的透鏡（需要工程師去現場服務）

　　7.HPLC出“鬼峰”，如何排除？

　　HPLC 出“鬼峰” 大部分發生在反相體系（甲醇， 乙腈， 水），是溶劑被污染造成的。還有一種原因是進樣系統有殘留。

　　-讓用戶運行一個空白梯度洗脫的方法，從100%水過渡到100%有機溶劑，如果“鬼峰”出現，可以判斷是水被污染了（水中有藻類Algae的污染）。如果用戶是使用純水機制作的水，這種現象是最常見的。建議用戶更換“娃哈哈”純凈水。

　　-進樣系統有殘留很容易判斷，建議用戶加強或改善洗針程序，延長沖洗Loop的時間。