ABO聯盟第五十期圓桌會議：聚焦臨床質譜

　　2017年8月18日，由ABO聯盟主辦，中國醫學裝備協會臨床質譜學組、北京毅新博創生物科技有限公司協辦的“2017年北京臨床質譜高端論壇-——暨ABO聯盟第五十期圓桌會”在北京河南大廈召開。本次會議就臨床質譜在微生物鑒定、核酸鑒定、蛋白質鑒定等方面的研究展開了探討。北京協和醫院檢驗科臨床微生物專業組肖盟、中國醫學科學院腫瘤醫院檢驗科主任崔巍、毅新博創董事長馬慶偉等100余人參加了此次會議。

會議現場

北京301醫院檢驗科博士后 陳琛

　　北京301醫院檢驗科博士后陳琛主持了此次會議。

北京協和醫院檢驗科臨床微生物專業組 肖盟

　　北京協和醫院檢驗科臨床微生物專業組肖盟帶來了《質譜——改變臨床微生物的面貌》的報告。

　　肖盟在報告中講到，MALDI-TOF MS——基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜是微生物實驗室的革命，由于生物大分子不穩定、極性強，很難實現離子化，以往學界共識是質譜上限分子量是1000D，所以想到用“軟電離”技術對生物大分子進行離子化，微生物質譜由此而來。MALDI-TOF MS有結果準確、成本降低、對少見的病原菌也能準確鑒定等優勢。他還講到質譜的鑒定能力與數據庫直接相關，北京協和醫院檢驗科臨床微生物專業組自建了數據庫，包括罕見菌種、新發菌種等。針對絲狀真菌、奴卡菌、分支桿菌等特殊病原開發了新的前處理方法和檢測方法。北京協和醫院檢驗科臨床微生物專業組還可以對光滑念珠菌復合本、季也蒙念珠菌、A群鏈球菌等疑難病原菌進行準確鑒定。

　　最后，他介紹了MALDI-TOF MS的一些拓展應用。包括直接檢測無菌體液及其他標本、血培養陽性標本直接檢測等。詳細介紹了血培養陽性檢測、艱難梭菌的檢測、毒素基因分型等。

中國醫學科學院腫瘤醫院檢驗科主任 崔巍

　　中國醫學科學院腫瘤醫院檢驗科主任崔巍帶來了《質譜循環多肽組檢測在惡性腫瘤中臨床應用進展》的報告。

　　崔巍在報告中講到，循環多肽組是血液或體液中的蛋白質所產生的具有特殊功能的活性多肽。它作為體內蛋白代謝產物或小分子蛋白，循環多肽組蘊含著豐富的疾病代謝及表型信息。美國的一個研究小組發現61種具有腫瘤特征的肽段標志物與不同蛋白酶活性之間存在直接關聯，證明了血清多肽組中蘊含的蛋白質降解模式，攜帶著具有臨床價值的腫瘤標志物信息。多肽組是由小分子化合物、生物大分子、多肽、蛋白質、核酸組成。

　　她在報告中還講到，多肽組是用質譜來測定，適合臨床用途的質譜是MALDI-TOF MS。基于MALDI-TOF質譜平臺的特點有：信號采集是自動化采集，以光柵方式定義激光掃描模式，產生斑點內離散X/Y坐標位置，生成多個光柵掃描的指定序列，從一個或多個點產生75萬或3000000次照射；同一點樣本點獲取多次轟擊值進行累加，多個轟擊點經過平均值處理獲取譜圖，經過去基線、平滑處理，得到譜圖，Deep-MALDI方法能過降低質譜圖噪音，微弱信號信息能夠顯現出來。

　　最后，她詳細介紹了基于MALDI-TOF的肺癌預后多肽譜分析——VeriStrat、基于MALDI-TOF質譜平臺的測定流程以及MALDI-TOF MS的一些應用拓展（PDL1治療療效預測、多癌種藥物療效預測）。

毅新博創董事長 馬慶偉

　　毅新博創董事長馬慶偉帶來了《臨床質譜在精準醫學的研究進展》的報告。

　　馬慶偉在報告中講到，國家質檢總局、國家標準委公開了《基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜鑒定微生物方法通則》（GB/T 33682-2017）標準文本，該標準于2017年12月1日開始實施。醫用生物質譜儀被寫入未來重點支持的十六個領域。科技部設立“2017精準醫學臨床質譜專項”。據統計，臨床質譜儀器中國市場潛力在1萬臺以上。而飛行時間質譜將引領分子診斷新時代。飛行時間質譜有四大應用平臺，分別是：基因質譜平臺、微生物質譜平臺、蛋白質譜平臺、糖基質譜平臺。毅新博創的Clin-TOF飛行時間質譜微生物鑒定系統有中國最大最全的數據庫和全球首家質譜云中心。Clin-TOF質譜儀可用于血培養報陽直接鑒定、B鏈球菌產前篩查等。MALDI-TOF新的應用領域有藥敏檢測、病毒檢測。毅新博創的MALDI-TOF MS核酸檢測平臺是國內首家CFDA認證的臨床飛行時間質譜，其軟件直觀、簡便、易懂，試劑是質譜專用的前處理試劑。毅新博創連續五年滿分通過衛生部室間質評。

　　他還講到FDA批準下一代測序敏感度不夠的情況下，MALDI質譜可作為驗證工具，核酸質譜是單核苷酸多態性檢測金標準。最后他介紹了MALDI-TOF MS與臨床蛋白組學以及飛行時間質譜在精準醫學中的應用，包括感染、腫瘤早期診斷及用藥指導、優生優育等。

中國康復研究中心北京博愛醫院 劉志忠

　　中國康復研究中心北京博愛醫院劉志忠帶來了《H型高血壓精準用藥的多基因關聯分析研究》的報告。

　　劉志忠在報告中講到，飛行時間質譜是已知突變位點檢測的最佳平臺，它有以下幾個優勢：無需采用硬紅光標記，直接檢測核酸分子量；精準度高，SNP檢測金標準；多位點檢測，可以檢測5-200位點；快速，每例樣本質譜檢測用時小于1分鐘；高靈敏度<3個拷貝；樣品用量少，只需10ng；生物信息學分析簡單<1分鐘；野生/突變檢出限0.1%。FDA已批準飛行時間質譜儀用于基因檢測。毅新博創自主研發的的Clin-TOF飛行時間質譜是國內首家CFDA認證的臨床飛行時間質譜。毅新博創的質譜檢測高血壓用藥基因多態性具有檢測周期短、檢測靈敏度和特異性高等優勢。

　　他還講到，目前與毅新博創合作，基于核酸質譜技術，建立了與降壓藥物相關的11基因（14個位點）的基因多態性檢測技術，通過了技術驗證（與Sanger測序比對）。檢測了98例H型高血壓患者的以上基因位點。

　　北京301醫院檢驗科博士后陳琛帶來了《核酸質譜專家共識》的報告。

　　陳琛在報告中講到，核酸與蛋白的特性不同，電離過程中更易碎片化，由于對于檢測結果的要求不同，基于MALDI-TOF原理，從基質，靶板，儀器參數設置、原始數據處理及結果呈現方式等多方面進行專門優化，才能有效的檢測。核酸質譜的應用方向有單核苷酸多態性檢測、基因突變檢測、DNA甲基化檢測、基因拷貝數鑒定。他還講到樣品前處理的核心是PCR和單堿基延伸。核酸質譜分子量檢測范圍為3000-9000（約10-29個堿基），檢測數據結果簡潔明了，分析簡單，無需復雜的生物信息學處理。其中單核苷酸多態性檢測應用于全基因組關聯分析（GWAS）研究，多基因遺傳疾病相關SNP位點大樣本量驗證。核酸質譜檢測流程耗時優于一代測序和高通量測序，可自主定制，樣本、位點的雙重靈活性高通量。基因突變檢測可用于病毒突變研究、微生物研究和腫瘤突變相關研究。核酸質譜用于基因突變檢測具有靈敏度高、可明顯區分出不同豐度之間的差異、穩定性好、定量檢測結果吻合度高等優勢。

　　他還講到，核酸質譜能夠方便快捷的進行PCR引物設計，可檢測未知的DNA甲基化狀態。而DNA甲基化檢測可用來研究疾病發病機制和新型分子標志物。并詳細介紹了核酸質譜甲基化的檢測原理。

中國人民解放軍總醫院臨床檢驗科主任 王成彬

　　中國人民解放軍總醫院臨床檢驗科主任王成彬帶來了《質譜的臨床應用》

　　王成彬在報告中講到QTOF MS/Orbit飛行時間/軌道離子阱分析器主要用于多肽、蛋白、未知物鑒定，MALDI-TOF MS主要用于多肽、蛋白、寡核苷酸、微生物、SNP基因檢測。而臨床質譜主要用于進行小分子檢測、新生兒遺傳代謝病、蛋白質多肽檢測和DNA檢測。LC-MS/MS為藥物篩選和確認的金標準，可同時檢測數十種藥物，可檢測類固醇類激素，可檢測維生素，可檢測微量元素、重金屬檢測。

　　他還講到，MALDI-TOF MS可用于微生物鑒定，其優點是快速、成本低、需菌少。質譜在臨床應用上有臨床應用范圍廣、特異性高、高通量等優點，但也存在一些不足，如設備成本高、方法需開發、高復雜性、標準化困難、應用臨床檢測的靈活性不高等。最后他希望將來質譜的發展能由通用型質譜發展為專用型質譜。