為了追蹤Western blot中產生的信息,研究人員大多需要使用成像系統。這些工具將蛋白分析的圖像轉換成數字文件。近年來,Western blotting成像系統有了明顯改進。在成像工具的幫助下,數據可以更好地定量。
與此同時,Western blot的操作也在不斷變化。研究人員正逐漸從暗室中走出來,去采用日漸流行的熒光Western blotting技術。熒光檢測有兩個主要優點:數據定量和多重分析。不過,化學發光檢測卻在靈敏度上更高一籌。此外,許多研究人員還需要一個能夠處理多個目標的系統。
在各種需求和技術的推動下,Western blotting成像系統如今已叫人刮目相看。
多功能平臺
許多新款的成像系統旨在為Western blot帶來一個完整的解決方案。這也是Bio-Rad在設計ChemiDoc MP成像系統時所考慮的。據該公司產品經理Raymond Miller介紹:“一般來說,研究人員需要多臺成像系統,比如膠片顯影系統和激光掃描儀,以適合不同的應用,甚至不同的靈敏度。ChemiDoc MP超越了這些傳統的方案,帶來了一物多用的便利性。”
Bio-Rad的ChemiDoc MP成像系統
許多供應商也希望輕松實現多功能。“我們在不斷開發創新的產品,以簡化Western blotting,”賽默飛世爾的高級產品經理Paul Haney說。“有了iBright成像系統,我們希望能夠改善實驗的便利、速度和質量,同時繞過x光膠片的限制。我們的iBright FL1000型號能與SuperSignal化學發光底物或Alexa Fluor Plus試劑無縫整合,在單次分析中最多檢測四種蛋白質。”
賽默飛iBright成像系統
為了滿足人們不同的成像需求,LI-COR Biosciences提供了三種產品:C-DiGit適用于化學發光,CLx適用于紅外,而Fc適合化學發光和紅外。在介紹這些平臺時,該公司的產品經理Jeffrey Harford表示,“我們的主要目標不是為客戶提供一款產品,而是一個完整的解決方案,以獲得立即可發表的Western blotting數據。這是一個巨大的市場,因為發表數據的要求會變得越來越嚴格。”
LI-COR Biosciences的C-DiGit Blot掃描儀
LI-COR Biosciences的Odyssey CLx成像系統
LI-COR Biosciences的Odyssey Fc成像系統
Syngene的G:BOX 系列成像系統也支持熒光和化學發光的檢測。它們采用移動平臺來取代數碼變焦,以實現高的分辨率和靈敏度。作為全球知名公司Synoptics的子公司,Syngene專為此用途而優化了CCD照相機。此外,這些系統的軟件還包括一個新穎的應用程序,實現了無需染色(stain-free)的凝膠捕獲和分析。
考慮到不同研究的需求,一些研究人員想要的不僅僅是基于LED-CCD的成像系統。GE Healthcare就提供了兩種不同的平臺。產品經理Joe Hirano表示:“對于靈敏的化學發光檢測和一般的熒光檢測,研究人員可以使用基于LED-CCD的Amersham Imager 600。對于高級的定量熒光檢測,他們則可以選擇廣受歡迎的Typhoon激光掃描成像系統。Typhoon系統帶來了高靈敏度和超高動態范圍(>5個數量級)的組合。”
Hirano指出,GE Healthcare最近推出了Typhoon NIR Plus激光成像系統。這是一臺近紅外的激光掃描成像系統,配置了三種激光,可以實現三重Western blotting,比如檢測兩種目標蛋白和一種看家基因。“這樣的平臺以及配合使用的產品,擴展了研究人員的選擇,”他談道。“例如,Amersham Quickstain和Typhoon NIR Plus的組合讓研究人員能夠實現更準確和重復的Western blot標準化。”
GE的Typhoon NIR Plus激光成像系統
最后,別忘了這是一個系統。Harford指出:“LI-COR的解決方案不僅僅包括儀器,還有關鍵的工具,如操作手冊、實驗方案和試劑,滿足發表文章的需求;當然,還有培訓,以滿足新的Western blot指南。”
成像一瞬間
這些系統的流程通常比較簡潔。“我們知道許多研究人員想快速獲取最佳圖像,不要花很長時間培訓,這樣他們就有更多時間來分析數據,”Miller指出。因此,Bio-Rad開發出Image Lab Touch軟件,幫助用戶在ChemiDoc MP上獲取圖像。此款軟件經過設計和檢驗,可確保用戶在幾分鐘內學會。
賽默飛世爾的產品經理Jessica Slack在介紹iBright FL1000和CL1000成像系統時表示,這些系統帶來了高的分辨率和靈敏度,以及先進的自動化特征。只需要開箱、安裝,幾分鐘內就能捕獲完美的圖像。這些儀器能幫助研究人員捕獲和記錄信息,因為它們每次能夠快速捕獲并自動分析4塊迷你印跡或凝膠的數據。毫無疑問,速度也是研究人員所關心的。
總而言之,未來的Western blot成像系統需要更快速、更智能。正如Harford所指出的,“現在有許多Western blot系統,但是如果它們的使用不能滿足出版方的要求,那么這會給研究人員帶來許多困擾。”相反,這些系統應該幫助人們簡化操作過程,更準確地分析數據,并發表更客觀、更完整的研究。
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