熒光分光光度計發展歷史及特點

處于基態的分子吸收能量 (以電、熱、化學和光能等形式) 被激發至激發態，然后從不穩定的激發態回到基態并放出光子，這種現象被稱為發光。物質吸收光能后所發生的光輻射的現象則稱為光致發光。分子發光屬于一類典型的光致發光，包括熒光、磷光、化學發光、生物發光和散射發光等類型。

一、發展歷史

熒光現象最早被西班牙內科醫生、植物學家Nicolas Monardes在1575年發現并記錄下來。1845年，John Frederick willam Herschel觀察到奎寧受日光激發產生熒光的現象。此后科學家們陸續發現更多的熒光材料和溶液，但對“如何產生熒光現象”的問題卻在很長一段時期內無法給出合理的解釋。直到1852年，Stokes用自制的分光計觀察到熒光波長比激發波長稍長，確定了有些物質在吸收光能后重新發射出不同波長的光，從而提出了“熒光”這一術語，并指出熒光是光發射現象，而不是光的漫射所引起的。此后，對熒光現象的研究和解釋日益增多，熒光分析法也逐漸發展成為一種重要的分析測試手段。

熒光分析方法的發展與熒光儀的發展密切相關。然而，熒光儀的發展僅有幾十年的歷史。1928年Jette和West，共同研制了世界上第一臺光電熒光計。1948年，Studer推出了第一臺自動光譜校正裝置，直至1952年才出現商品化的校正光譜儀器。近幾十年來，熒光儀器隨著激光、微處理機等新技術的引入得到迅猛發展，不斷研制出了各種功能新穎的熒光分析儀器，從最初的手控式熒光分光光度計發展到自動記錄式熒光分光光度計、再到由計算機控制的熒光分光光度計；從最初的未校正光譜到帶可校正光譜的熒光分析儀。分析工作者只需將處理好的樣品放進熒光分光光度計內，即可得到所需的譜圖及數據，操作更加方便、快捷。儀器制作上的這些革新，不僅方便了分析工作者，也必將促進熒光分析法的更快發展。

二、特點

熒光作為分析手段需通過熒光分光光度計實現。熒光分光光度計就是用于記錄激發光譜和發射光譜的儀器，它能提供包括激發光譜、發射光譜、熒光強度、特征峰值、量子產率、熒光壽命、熒光偏振等物理參數，以便從各個角度反映分子的成鍵和結構情況。通過對這些參數的測定，不但可做一般的定量分析，而且還可用于推斷分子在各種環境下的構象變化，從而闡明分子結構與功能之間的關系。熒光分析法的靈敏度較高，通常比紫外一可見分光光度法高2～3個數量級；熒光光譜法還具有選擇性強、用樣量少、方法簡便、工作曲線線性范圍寬等優點，在材料、生命科學、生物醫藥、臨床診斷、石油勘探以及環境監測等諸多領域都得到了廣泛的應用。

熒光儀可測液體、固體粉末、膜類樣品。利用它不僅能直接、間接地分析眾多的有機化合物；另外,還可利用有機試劑與金屬離子間的反應，進行近70種無機元素的熒光分析。
熒光分光光度計并不是理想化的儀器，由于激發光源、單色器、檢測器等儀器組件存在明顯的光譜特性，一般熒光分光光度計所測得的譜圖均為表觀光譜 (未校正過的光譜)，并不是真實的熒光光譜。在常規的定量測定中，得到的光譜是表觀光譜并不會影響測試結果。但也有一些情況下，必須要求采用真實的熒光光譜，比如測量熒光量子產率時，進行積分的光譜必須是經過校正后的真實光譜。