葛根含量測定方法（葛根素）

　　 葛根為豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi的干燥根。2005版《中國藥典》一部采用高效液相色譜法測定其葛根素的含量。

　　 一、高效液相色譜法

　　 2005版《中國藥典》葛根含量測定項下：

　　 色譜條件與系統適用性試驗：以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水（25：75）為流動相；檢測波長為250nm。理論板數按葛根素峰計算應不得低于4000。

　　 供試品溶液的制備：取本品粉末約0.1g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入30%乙醇50ml，稱定重量，加熱回流30分鐘，放冷，再稱定重量，用30%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

　　 HPLC法測定葛根及其制劑中葛根素的含量時，使用最多的流動相系統為甲醇-水系統，另外還有甲醇-水，加醋酸調節pH等。

　　 A：以甲醇-水為系統的，常見的比例及實驗條件為：

　　 ①Waters2695/ 2996/ Empower 色譜系統；色譜柱Symmetry C18 柱( 3.9mm×150mm, 5μm)；流動相：甲醇-水(25：75)；DAD檢測波長254nm；柱溫35℃。

　　 ②SP8800 型高效液相色譜泵；Hypersil ODS (4.6mm×250mm,5μm大連依利特科學有限公司)；流動相：甲醇-水(30：70)；柱溫40℃；檢測波長250nm。

　　 ③Waters高效液相色譜儀；十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱（4.6mm×250mm,5μm）；甲醇-水（40：60）為流動相；檢測波長為250nm；柱溫30℃。

　　 ④美國Spectra-Physics 液相色譜儀；色譜柱Lunm C18 (150mm×4.6mm, 5μm ) 不銹鋼柱(美國Phenom enex 公司)；流動相為甲醇-水(28：72)；檢測波長250nm；柱溫30℃。

　　 B：乙腈-水系統：

　　 ①LC-10ATvp高效液相色譜儀；Hypersil ODS 色譜柱(4.6mm×150mm,5μm)；乙腈-水(15：85)為流動相；檢測波長250nm。

　　 ②TSP 高效液相色譜儀；色譜柱Turner C18H37（5μm，4.6mm×150mm）；流動相：乙醇-水(43：207)；柱溫30℃；檢測波長250nm。

　　 C：加酸調節的，如：

　　 ①LC-10A高效液相色譜儀；色譜柱為ODSC18柱（5μm，4.6mm×150mm）；流動相為甲醇-水（35：65），內含0.01%醋酸；柱溫35℃；檢測波長251nm。

　　 ②SP-8800高效液相色譜儀；色譜柱ODS-C18柱(4.6mm×250mm,5μm)；流動相：甲醇-1.4%醋酸溶液( 22：78 )；柱溫室溫；測定波長: 250nm。

　　 ③美國Beckman公司高效液相色譜儀；Hypersil ODS柱（2.5μm，4.6mm×250mm）；流動相為甲醇-氯仿-1.5%冰醋酸（22：1：77）；檢測波長250nm。

　　 ④SP1000 高效液相色譜泵；色譜柱YMC C18不銹鋼柱(4.6mm×150mm,5μm)；流動相：甲醇-水醋酸(42∶100：0.2)；檢測波長250nm；柱溫:室溫。

　　 其它如：呂竹芬等測定心血寧滴丸中葛根素的含量，采用高效液相色譜法，Dikma piamonsil C18色譜柱(4.6mm×200mm,5μm)，以甲醇-乙腈-水(30：2 ：65)為流動相，流速為1.0mL/min，檢測波長250nm。

　　 顏春華等測定腦得生片中葛根素的含量，采用日本島津LC-4A高效液相色譜儀；色譜柱DiamonsilTM (鉆石) C18(200mm×4.6mm,5μm)；流動相：乙腈-甲醇-0.1%枸櫞酸溶液(5：25：75)；紫外檢測波長250nm；柱溫室溫。

　　 制備樣品溶液時，一般以30%乙醇、50%乙醇、乙醇、甲醇、流動相或鹽酸溶液（9→1000）等為溶劑，采用超聲法提取。

　　 二、其它

　　 楊振林等測定葛根沖劑中葛根素含量，采用薄層 -紫外分光光度法，751GD 型分光光度計(上海分析儀器總廠)。薄層層析硅膠G板,以氯仿-甲醇-水(7：28：0.2)為展開劑,在紫外燈(365nm)下定葛根素位置,刮下斑點,用甲醇洗脫,測定波長為251±1nm。

　　 崔小兵等測定通脈顆粒劑中葛根素及阿魏酸的含量，采用雙波長(λ1= 250nm ,λ2=313nm) 梯度洗脫法。Waters 2690 型高效液相色譜儀；色譜柱Kromasil C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；柱溫為30℃,甲醇-1%醋酸水梯度洗脫；檢測波長為250nm；柱溫30℃。

　　 方崇波等采用離子絡合紫外分光光度法測定葛根素及其制劑的含量，采用UV4/2401 紫外分光光度計(島津)。方法：:在pH=4.0條件下,葛根素和Al3+形成絡合物,在339.8 nm波長處通過測定吸收度的改變來測定含量。