9月27日,賽默飛世爾科技借分析測試百科網這一平臺成功舉辦了“Q Exactive 蛋白質組學研究的綜合平臺”網絡講座。賽默飛世爾科技李靜工程師為大家介紹了Q Exactive高性能臺式四極桿—軌道阱系統的基本組成及特點,著重講解了Q Exactive 在蛋白質組學應用的優勢。
賽默飛世爾科技創新的Orbitrap(靜電場軌道阱)技術是質譜屆的革命,縱觀Orbitrap質譜儀發展史,我們可以清楚看到:
2005年6月賽默飛世爾科技發布LTQ-Orbitrap
2006年6月賽默飛世爾科技發布LTQ-Orbitrap XL
2007年3月賽默飛世爾科技發布LTQ-Orbitrap XL/ETD
2008年6月賽默飛世爾科技發布臺式Orbitrap Exactive
2009年6月賽默飛世爾科技發布LTQ Orbitrap Velos
2011年6月賽默飛世爾科技發布Q-Exactive臺式Orbitrap高分辨率質譜、LTQ Orbitrap Velos pro LTQ Orbitrap Elite
Q-Exactive于2011ASMS大會上推出,是第一臺集四極桿母離子選擇和高分辨率Orbitrap的商品化儀器,具有高達140,000FWHM的分辨率,并創新地提出了“Quanfirmation”的功能,能夠提供高可信度的定量和定性工作流程。
Orbitrap——靜電場軌道阱的原理
1、Orbitrap 離子的捕獲不依靠射頻電壓(IT)和磁場(FT-ICR),而是靠靜電場,維護成本大大降低
2、由中央電極和外電極組成,離子圍繞中央電極運動時,其初始切線速度引起的離心力與電極對離子的靜電引力相互補償,離子被束縛
3、端電極形成的電勢屏障限制了離子的軸向運動
4、可通過適當改變電極性狀控制離子的震蕩頻率
通過電動力擠壓技術,將離子引入阱內。離子在靜電場的作用下繞中央電極在兩電極間的旋轉的同時以一定的頻率沿軸向諧振,離子諧振的頻率與其質荷比的負二分之一次方成正比。
通過鏡像電流檢測器對共振頻率在時域進行非破壞性測定,然后用傅里葉變換即可得到質譜。
Orbitrap質量分析器的幾大核心優勢
1、不需要液氮消耗,運行維護方便且成本低
2、不存在電子倍增器的消耗問題,不存在因電子倍增器的消耗引起的信號衰減問題,非破壞性檢測器,可持續利用,易維護
3、高真空工作環境,超乎尋常的質量準確度和穩定性
4、高分辨率。高質量準確度,高靈敏度,寬動態范圍。。。
5、廣泛的用戶群和認可度
臺式Orbitrap高分辨率質譜-Q-Exactive
Q-Exactive內部結構
該儀器的特點如下:
-高分辨率
-高質量精度
-高掃描速度
-高靈敏度
-HCD碰撞模式保證了TMT標記定量結果的準確性
-寬線性動態范圍
-同時注入和檢測多重譜圖可提高采集速度和通量
Q-Exactive用于蛋白質組學研究的優勢
Q Exactive 蛋白質組學研究的綜合平臺的優勢,可從以下方面充分體現:
新性能 | 優勢 |
新型離子光學系統(S-lense)提高靈敏度 | 鑒定到更多蛋白質和肽段 |
四極桿(Quadrupole mass filter)母離子選擇 | 可采用SIM方法提高性噪比改善LOQ/LOD |
C-Trap和高能量裂解碰撞室(HCD cell) | 提高系統的靈敏度和定量分析性能(TMT,iTraq) |
先進的信號處理程序提高分辨率至14萬 | 更準確的鑒定和定量(SILAC,label free,Targeted Quan) |
同時注入和檢測(Cocurrent injection and detection) | 提高Duty cycle |
多重譜圖(spectrum multiplexing)提高采集速度 | 更高的通量 |
接下來李老師通過具體的應用實例對上述各個特點進行了深入分析。在Top Down研究中,Q-Exactive可實現分子量高達47kDa的完整蛋白質的同位素分離,其一級和二級質譜都可以獲得高分辨數據;在采用外標法分析E.Coli全細胞裂解物,其質量準確度達到1.5ppm(RMS);HCD高能碰撞模式保證了TMT標記定量結果的準確性;Q Exactive還可利用SIM模式實現目標肽段的定量,具有獨有的平行離子注入C-Trap和譜圖疊加功能(MSX),實現了高采集速度、高靈敏度和高通量。
Q-Exactive在高分辨率(14萬)、高質量準確度的基礎上可同時保證高靈敏度、高采集速度;一個平臺涵蓋蛋白質組學的定性和定量要求,創新的HR/AM Quanfirmation功能,可在一次分析中完成包括發現、定量和確證3個工作流程;其定量靈敏度相當于三重四極桿,具備寬定量線性動態范圍,并且具備完整的定性和定量流程。蛋白質組學研究中,對目標肽段/蛋白質的發現、相對定量、絕對定量和確認可在Q-Exactive同時實現。
本網收錄產品:臺式Orbitrap高分辨率質譜-Q-Exactive
講座錄制文件下載:https://antpedia.webex.com.cn/antpedia/k2/e.php?AT=RINF&recordingID=887247
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