成功克隆PKD第一個致病基因

　　近日，來自復旦大學、福建醫科大學與中國科學院上海神經科學研究所的研究人員應用先進的全外顯子測序技術，在8個家族性發作性運動誘發性運動障礙（簡稱為PKD）家系中，發現PRRT2基因上存在3種截短突變，并通過多層次驗證，結合PRRT2基因表達及蛋白定位研究，最終成功克隆了家族性PKD的第一個致病基因PRRT2，這對充分理解該病的分子發病機制以及提高本病臨床診治水平具有深遠意義，它巧妙地解決了20年來困擾國內外學者的難題。這一研究結果11月20日在《自然遺傳》雜志在線發表，該雜志的影響因子達36.377分。

　　該研究項目由國家自然科學基金和福建省科技計劃項目資助，領銜者是復旦大學附屬華山醫院的吳志英教授與福建醫科大學附屬第一醫院的王檸教授。

　　PKD也稱為發作性運動誘發性舞蹈手足徐動癥，是一種反復發作的、運動誘發的、持續時間短暫的運動障礙，卡馬西平治療有顯著療效，臨床上易被誤診為癲癇。自1967年首次報道后，陸續有關于散發性和家族性病例的報道，家族性病例大多呈常染色體顯性遺傳。從上世紀90年代起，先后有學者通過連鎖分析，將PKD的致病基因定位于16號染色體的兩個區域，但一直未克隆到其致病基因。

　　早在2005年底，吳志英教授與王檸教授帶領的團隊在福建發現了一個特殊的家系，在4代共78名成員中有16人發病，且每代均有病人出現，主要表現為從坐位起立或起步行走或跑步時，突然出現雙上肢舞蹈樣動作，頸部和軀干向一側扭轉，嚴重時站立不穩摔倒在地，持續數秒至數十秒停止；反復發作，每日可發作數十次，發作時意識清楚。經過查閱文獻并反復討論，考慮這是一種家族性PKD，給予卡馬西平治療數天后病人癥狀完全消失。之后又陸續收集了7個類似癥狀的家系。該團隊在2007年采用傳統的家系連鎖分析方法將本病的致病基因定位在16號染色體上，但未克隆到真正的致病基因。

　　近兩年來，新一代測序技術問世，并在其它遺傳病的基因克隆方面得到了良好的應用，研究團隊利用這一國際最新動態，重新核對了8個家系的資料，在最大的家系中選取了兩個有代表性的病人以及兩名無癥狀的家系成員進行分析，共獲得了100多億個核苷酸序列數據，最終將目標鎖定在16號染色體的PRRT2基因，進一步直接測序驗證，發現了PRRT2基因截短突變，該結果在其它7個PKD家系中得到了證實，共發現了3種截短突變。

　　由于共有6個不同的家系均含有同一種截短突變，為鑒定這一突變是否為來自同一祖先的“奠基者效應”，復旦大學泌尿外科研究所的徐劍鋒教授利用其高通量的基因分析平臺，迅速解決了這一問題。為了探討PRRT2的蛋白功能及其與PKD發病之間的關系，該團隊又與中國科學院上海神經科學研究所的熊志奇研究員團隊合作，在短時間內完成了PRRT2基因表達及蛋白定位研究，結果進一步提示PRRT2為PKD的致病基因。