定量分析是紫外可見分光光度計應用中的最主要用途。這里簡要介紹7種定量分析方法：
(1)絕對法 目前，絕對法是紫外可見分光光度計諸多分析方法中使用最多的一種方法。
(2)標準法
(3)比吸收系數法 比吸收系數法多用于測定樣品溶液的濃度。但是，根據比耳定律，被測試樣溶液的濃度與吸光度應呈直線關系，而在實際測試中，如果試樣的濃度較高時，會發現實際測量到的吸光度值偏離線性關系。這種偏離比耳定律的原因，是由于紫外可見分光光度計的雜散光、噪聲、基線平直度和光譜帶寬，以及試樣的前處理、試樣的化學平衡等所引起的。因此，一般情況下，不采用這種方法。
(4)標準曲線法 紫外可見分光光度計最常用的定量分析方法是標準曲線法。首先，用標準物質配制一定濃度的溶液，然后，將該溶液配制成一系列的標準溶液。在一定波長下，測試每個標準溶液的吸光度，以吸光度值為縱坐標，標準溶液對應的濃度值為橫坐標，繪制標準曲線。最后，將樣品溶液按標準曲線繪制程序測得吸光度值，在標準曲線上查出樣品溶液對應的濃度或含量。
(5)最小二乘法 最小二乘法實際上也就是回歸方程法。因為，分光光度法中試樣的吸光度A與試樣的濃度C之間的關系可用一條直線來描述。即c=aA+b（o、6為常數）。應注意兩點：
①回歸方程是在特定條件下求得的，不能隨便套用；
②分光光度法中試樣的吸光度A與試樣的濃度c之間的關系，應建立在回歸方程中的取值范圍內，否則，不能隨便外推。
(6)解聯立方程法 解聯立方程法只適用于兩個以上、在紫外區吸收峰互不重疊組分的測定，也不是常用的方法。
(7)示差分光光度法 不差分光光度法也不是紫外可見分光光度計應用中常用的方法。應注意三點：
①示差分光光度法中最重要的是選擇適當濃度的參比溶液，參比溶液越接近樣品溶液，則測定的結果就越準確；
②示差分光光度法解決了普通分光光度法中不適用的高含量或痕量物質的分析問題；
③示差分光光度法要求紫外可見分光光度計的穩定性好、靈敏彥高（噪聲小、雜散光小）。