淺析血液分析儀的測試原理及注意事項

　　近年來,隨著醫院實驗室設備的全面改善,各種類型的血液分析儀迅速在全國普及,不但提高了工作效率和檢驗質量,還為臨床提供了實驗指標。但由于對血液分析儀的原理尚缺乏足夠的了解和經驗,有些單位在使用過程中出現了 些問題,甚至得出錯誤的結果,貽誤臨床診斷。現就儀器應用中的一些共性的問題作初步探討。 

　　 
　　1 自配試劑的應用 
　　目前國內使用的血液分析儀基本上是進口產品,絕大部分因電阻不同采用阻抗法。阻抗法記數細胞的原理是基于細胞在測試系統中產生的脈沖大小與儀器設定的閾值比較而得出的數據,脈沖大小除與細胞大小有關外(如粒細胞脈沖最大、淋巴細胞脈沖最小)還與溶血劑的種類,稀釋液的滲透壓、離子強度、電導率、儀器出廠時固定的孔電壓和脈沖的增益率等有關,因此欲得到準確結果,原則上應使用原儀器的配套試劑[1]。進口試劑價格昂貴,但用自配試劑應具備以下條件。①自制試劑在成分和劑量上與配套試劑不盡相同,但同一份血液在配套試劑體系(稀釋液+溶血劑)與自配試劑中細胞產生的脈沖信號應是相同的。血細胞分類直方圖是重合的,細胞分類結果應一致,如達不到這一點,不能代替進口試劑。②在紅細胞、血小板測試系統中,紅細胞數、紅細胞平均體積(MCV)、血小板平均體積(MPV)在兩種試劑中所得的結果應是相同的(如果儀器的記數閾值是可調的,至少應在允許的變異范圍內)。空白記數應符合儀器的標準。③溶血劑溶解血細胞的程度、速度及血紅蛋白與溶血劑使用后的吸收光譜與HiCN應相似,吸收峰值最好在540nm。④自配試劑的成分不應損壞儀器的部件或影響使用壽命。 
　　2 直方圖分析及白細胞分類的正確使用 
　　細胞直方圖既給臨床提供診斷參考數據,也為操作人員提供對儀器工作狀態和實驗結果是否可信的監控,一般必須在仔細分析直方圖之后,確定是否需要顯微鏡檢查再報告。這一點在白細胞分類尤為重要。盡管現代高科技不斷在血液分析儀上應用,多方位測量同一細胞的高檔血液分析儀相繼問世,但迄今尚無一臺血液分析儀能完全代替顯微鏡進行細胞分類記數,目前國內少數單位在白細胞分類時,只用儀器忽視顯微鏡檢查傾向必須糾正。 
　　3 血液的采取 
　　按自動化程度,血液分析儀分為半自動和全自動兩類,兩者的主要區別在于血液是否需要預稀釋。半自動儀器通常要事先用稀釋劑稀釋血液,全自動血液分析儀直接使用抗凝血在儀器內自動稀釋。不但減少了實驗誤差,提高了結果的精確性也減少了操作人員感染幾率。當前不少醫院使用末梢抗凝血用于用血量較少的儀器,雖然可得到可以接受的結果,但受末梢血循環狀態、采血技術的影響,有時血液易形成小凝塊,堵塞機器造成實驗結果的偏差,且增加了操作人員與血液直接接觸的機會,因此,為了能合理使用全自動分析儀,除了嬰、幼兒或需多次進行常規檢查的病人外,皆應使用靜脈抗凝血[2]。抗凝劑的選擇不容忽視。ICSH推薦k3-EDTA或K2-EDTA, 
　　4 紅細胞MCV、RDW對鑒別貧血具有重要臨床意義 
　　傳統文獻長期應用MCH、MCHC、MCV值將貧血分為大細胞性貧血、正常細胞性貧血、單純細胞性貧血、小細胞低色素性貧血四種類型。但紅細胞的平均值在貧血時的變化是不典型的,切不能反映紅細胞體積大小的離散程度,對貧血的鑒別非常籠統。MCV作為評價紅細胞平均體積的指標對紅細胞的改變較為敏感。但在外周血中存在雙型紅細胞(正色素與低色素二者并存)時,MCV常處于正常范圍,從而無法反映紅細胞體積大小離散程度。RDW是表示紅細胞體積大小分布的參數,其升高表示紅細胞體積大小不一,差異增大。將RDW與MCV參數結合起來進行貧血形態學分類[3],可將貧血分為:①RDW正常,MCV降低,為紅細胞均一性貧血,其紅細胞之間大小變化不明顯,體積普遍偏小。如單純小細胞性貧血。②RDW正常,MCV正常,為正細胞均一性貧血,其紅細胞體積大小及分布與健康人基本一致。如再生障礙性貧血。③RDW正常,MCV增加,為大細胞均一性貧血,其細胞體積普遍偏大,細胞間大小變化不明顯,如惡性貧血。④RDW增加,MCV降低為小細胞不均一性貧血,紅細胞體積偏小,大小不均,細胞大小差異大,如缺鐵性貧血。⑤RDW增加,MCV正常為正細胞不均一性貧血,其外周血存在雙型細胞,細胞體積大小不均一,MCV可維持在正常范圍。如鐵粒幼細胞貧血。⑥RDW增加,MCV增加。為大細胞不均一性貧血,紅細胞體積增大,大小差異明顯。如巨幼細胞性貧血,溶血性貧血。 
　　5 血細胞分析儀的一些誤差原因及防止 
　　血細胞分析儀的誤差可來自多方面,如血樣的污染、稀釋不當、未充分溶血或過度溶血及某些疾病的影響等。 
　　如Hb原因:①高脂乳糜血渾濁而引起假性升高。可用含非顆粒稀釋物如正常人AB型血清或生理鹽水替換處理血漿解除。②白細胞>100×109/L的肝病,一些血紅蛋白病出現異常靶細胞也可干擾,可用離心或過濾法除去。③高膽紅素血癥。④明顯的體內溶血,血漿游離Hb影響致MCH、MCHC升高。⑤冷球蛋白及副球蛋白,因試劑離子強度低滲及pH改變或血中四胺鹽等原因影響測定。 
　　WBC假性升高也有多種原因。如:①血小板凝聚團酷似白細胞,一般假性可用稀釋,混勻法解聚,而EDTA抗凝劑依賴的血小板聚集也可造成白細胞假性升高。②巨球蛋白血癥,淋巴系統增生性疾病、感染等,血漿內含冷球蛋白在室溫情況下可使非定形物質聚集[4]。產生一些聚集物導致白細胞升高,可將稀釋標本置37℃水浴10min后再計數以消除影響。③在血中存在高效價紅細胞聚集素及較多靶細胞的新生兒、早產兒,因紅細胞溶血不全而影響WBC計數。④M蛋白癥,在低pH時,M蛋白可與溶血劑反應使WBC升高。 
　　WBC假性減低可因標本久置白細胞變性或白細胞凝集素或非特異性凝集素使白細胞變性破壞,臨床用免疫抑制劑的尿毒癥病人,WBC也可減低。 
　　影響血小板計數的原因很多,如非血液成分的污染、冷球蛋白血癥的沉淀物可致假性血小板增多。血小板減低可因未充分抗凝血液細小凝結,IgG或IgM凝集素與EDTA依賴或抗凝不夠等引起。 
　　6 應用分析儀對技術人員的要求 
　　隨著高新技術在醫學檢驗中的應用,技術人員的培訓更顯得重要。先進的血液分析儀需要高素質的人員去使用,這些人員:①上崗前應仔細閱讀儀器說明書或接受良好的培訓,要對儀器的原理、操作規程,使用注意事項,異常報警的含義,引起實驗誤差的因素及維護有充分的了解,掌握用ICSH推薦的標準方法校正儀器的每一個測試參數。②注意分析前、分析中、分析后全面質量控制、嚴格管理標本的采取、處理、運輸,注意病人生理或者病理因素對實驗造成的誤差或服用某些藥物的干擾作用;分析中隨時監控儀器的工作狀態,注意工作環境的電壓變化和磁場、聲波的干擾,根據質控圖的變化及儀器的調試,測試后要根據臨床診斷,直方圖的變化,各項參數的相互關系,確認無誤后方可發出報告。③必須具有高度的責任心和事業心,因此必須重視技術人員醫德醫風的教育和專業知識水平的提高。在儀器的選購方面除了要對儀器本身的質量、功能和售后服務等認真考察外,還要對本地區本單位的環境條件,人員素質,工作量的大小以及經濟承受能力等作全面的考慮。 
　　綜上所述,隨著各種先進血液分析儀的不斷應用,實踐經驗的不斷積累,專業人員技術水平不斷提高,先進的血液分析儀必將在臨床醫療工作中發揮更大的作用。