糖尿病是一種多發性的全球性疾病，WHO預計2025年全球將有多達3億多糖尿病患者，我國糖尿病患病率也呈逐年上升的趨勢。糖化血紅蛋白（glycosylated hemoglobin HbAlc）是血液內血紅蛋白與葡萄糖結合的那部分，其含量正相關于血糖濃度，反應血糖升高患者的1-2個月前平均血糖水平，是糖尿病血糖控制的金標準。HbAlc檢測方法根據不同的檢測原理分為三類，包括陽離子交換層析法、免疫凝集法、微柱法、高壓液相色譜法等。本文選用北京利德曼公司的糖化血紅蛋白測定試劑，通過免疫凝集法檢測HbAlc，評價其檢測效果的可靠性與準確性，比較進口試劑與國產試劑的差異性。
1 材料與方法1.1 儀器與試劑:全自動生化分析儀：日本產希森美康 AU680；糖化血紅蛋白分析儀：BIO-RAD VARIANTⅡ（美國）；試劑：希森美康原裝試劑，BIO-RAD VARIANTⅡ（美國）配套試劑：校準品（BB62636）、離子交換柱（EA51800）、全血底物（AA70003）；北京利德曼公司試劑盒（70711G211）:包括溶血劑、血紅蛋白測定試劑及糖化血紅蛋白（HbAlc）檢測試劑，核準液（3670506）。1.2 標本:根據糖尿病的診斷標準（2007版），收集2010年3月-2010年8月經我院確診的45例糖尿病患者（病理組）和45例正常健康人（健康組）血液標本，所有標本均采集空腹靜脈血，采用 抗凝，密閉室 保存，2d內檢測。高膽紅素血清與高三酰甘油血清分別從黃疸患者和高脂血癥患者采集，4次檢測總膽紅素與直接膽紅素，然后取平均值。1.3 方法:(1) 精密度實驗 選取病理組與健康組全血樣本各一份,每天上、下午分別測定1次，共測定10d,連續測定20次，計算批內與批間CV值。(2)抗干擾實驗 取高膽血紅素血清、高三酰甘油血清、高尿素血清三種干擾物質，按1/5-5/5不同的比例，加入病理組與健康組混合全血標本中，檢測糖化血紅蛋白HbA1c濃度。(3) 線性分析 選擇已知HbA1c濃度標準液，配制5.3、7.8、10.3、13.2、15.0等5個不同百分濃度的標本，每個標本進行4次HbA1c濃度檢測，對檢測結果作線性回歸分析，比較理論濃度與實測濃度的相關性。(4) 相關性分析 把病理組與健康組共計90例標本分別在全自動生化分析儀（AU680）和糖化血紅蛋白分析儀（BIO-RADVARIANTⅡ）測定HbA1c值，并對比分析檢測結果。(5)時間影響分析 將混合全血標本與溶血標本置于 密閉室內，于1d、2d、1wek、2wek、1月、6月后進行4次檢測，獲取4次檢測的平均值，分析時間因素對檢測結果的影響。(6)方法學評價 根據楊昌國等介紹美國臨床實驗室評價方案。(7) 統計學處理 使用SPSS13.軟件包，重復性統計結果采用平均值加標準差表示（x），檢測結果作配對t檢驗，以P<0.05表示差異有統計學意義。2 結果2.1精密度 取病理組與健康組標本各一份，重復例數20次，批內測定HbA1c平均百分值（10.53±0.07），CV為3.12%；批間測定HbA1c平均百分值（7.85±0.14），CV值為3.41%；批內批間值均小于4%，精密度良好。2.2 抗干擾試驗 膽紅素、三酰甘油、尿素三種物質對檢測結果沒有明顯影響，在可信區間范圍內，抗干擾性能較好。干擾實驗結果如表1所示。表1 干擾實驗結果(x-±s)2.3 線性分析 從稀釋線性分析可以看出，線性良好，實測濃度數值與理論數值契合度很高，R2=0.992。線性回歸分析曲線如圖1所示。圖1 稀釋線性分析曲線2.4 相關性分析 通過對病理組與健康組的糖化血紅蛋白檢測與全自動生化分析，經配對t檢驗，病理組t=0.213,P=0.835 （P>0.05），,健康組t=0.712，P=0.486，（P>0.05），差異無顯著性，表明兩者具有相同的檢測能力。檢測結果如表2所示。表2 免疫法與色譜法檢測病理組與健康組結果比較(x-±s)2.5 時間影響分析 在 密閉室內，全血標本放置2周結果穩定，1個月后檢測結果比均值低；溶血標本放置6個月結果穩定。時間因素對結果的影響如表3所示。表3 密閉條件下全血標本及溶血標本時間影響分析（%）3討論2008年，美國糖尿病協會與歐洲糖尿病研究會聯合提出糖尿病治療目標濃度為HbAlc不大于7%；。也就是說，在檢測HbAlc過程中，必須保證在7%左右濃度時檢測的準確性，滿足臨床診斷和監控糖尿病的目的。免疫凝集法利用糖化血紅蛋白抗體結合凝集素，升高溶液中的聚光度，通過競爭HbAlc抗體結合位點，使凝集素與HbAlc抗體的結合速度降低，利用700nm吸光度升高與糖化血紅蛋白濃度成反比、600nm總血紅蛋白濃度與吸光度升高成正比的原理快速簡捷地檢測HbAlc的目的。本組檢測結果表明，使用北京利德曼公司試劑盒免疫凝集檢測HbAlc時，其線性范圍、稀釋變異完全符合檢測要求，檢測最低濃度限度為0.075g/L，而且不精密度小于5%，檢測結果與美國糖化血紅蛋白分析儀進行比較，差異無顯著性(P>0.05)；從抗干擾實驗分析，黃疸、血脂等因素對免疫凝集法無明顯干擾，說明免疫凝集法有一定的抗干擾性。本組實驗還表明，在 密閉室環境中，放置2周時間內，全血標本對HbAlc結果無明顯改變；放置6個月溶血標本HbAlc檢測結果無明顯改變。特別是對于溶血標本，由于可以長時間保存，能夠實現長時間的質量控制，有助于療效的評估的延續性及治療的可靠性。日本希森美康公司生產的AU680全自動生化分析儀分析測定快速，有較高的準確度與靈敏度，但其配套進口試劑價格昂貴，患者難以接受。在保證結果準確可靠的前提下，用國產糖化血紅蛋白試劑和原裝糖化血紅蛋白試劑，對糖尿病人及高危人群標本分別用進口與國產試劑進行測定，通過精密度實驗、抗干擾實驗、線性分析、相關性分析、時間影響分析，證實國產試劑檢測HbAlc完全能夠滿足臨床需求，體現了良好的應用前景，可代替進口試劑。
