純凈的山梨酸鉀在254 nm處有最大吸收峰。樣品經三氯甲烷提取后,再以碳酸氫鈉提取,使山梨酸形成山梨酸鈉溶于水溶液中,測其吸光度即得。
1.主要儀器
紫外分光光度計UV-1300。
2.主要試劑
①三氯甲烷:以三氯甲烷體積之半的碳酸氫鈉(o.5 m01.L-1)提取兩次,而后以無水硫酸鈉干燥,過濾備用。
②0.5 mol·L-1碳酸氫鈉:取21 g碳酸氫鈉溶于500 mL水中。
③0.3 mol·L-1碳酸氫鈉。
3.操作步驟
①標準曲線的繪制:用0.3 mol·L-1碳酸氫鈉溶液和山梨酸配成0、1、2、3、4、5 g·mL-1的標準溶液,于254nm波長下分別測其吸光度。以濃度為橫坐標、吸光度為縱坐標繪圖,即可得山梨酸的標準曲線。
②樣品溶液的制備:稱取50.00 g樣品加350 mL水于組織搗碎機中,粉碎5 min,使成勻漿,用水稀釋至500 mL,搖勻。準確稱取10 g此勻漿,定量轉移于50 mL容量瓶中,以水定容,混勻。準確移取10 mL此溶液于250 mL分液漏斗中,用1.0mL氯仿提取1 min。將氯仿層轉至125 mL錐形瓶中,內置5 g無水硫酸鈉,振蕩后靜置。
③樣品中山梨酸的測定:移取上述的氯仿溶液50 mL于125 mL分液漏斗中,用25 mL0.3 mol·L-1碳酸氫鈉提取l min。靜置分層后,小心放去氯仿層。取碳酸氫鈉溶液層,于254 nm處測其吸光度。從標準曲線找出其山梨酸的含量,即可算出樣品中山梨酸的含量。
4.計算
山梨酸含量(μg·g-1)= (從標準曲線上查得三梨酸鉀的含量×稀釋倍數)/樣品重(g)