一、標本處理方法對結果的影響
1、采血部分
血液分析一般要求用抗凝的靜脈血,盡可能不用末梢皮膚穿刺采血。因為不同部位皮膚穿刺血的細胞成分及細胞與血漿的比例常不一致,與靜脈血的差別更大 。從技術角度講,毛細血管采血量較少,全自動的血液分析儀需血量較大,不易采到足夠量,更不能在需要的時候進行重復檢查,因此除了少數不易取靜脈血如嬰兒、大面積燒傷的病人及某些需要經常采血檢查的病例,如白血病、腫瘤放療或化療病人外,均應采用靜脈血檢測。
2、容器的選擇
存放抗凝血的容器應盡量采用密閉式的,以防止水分蒸發或環境污染等方面的影響。為了減少對血小板分析的影響,應使用塑料試管,采血后應立即混勻。如果采用玻璃制品應首先對容器進行硅化處理,以防止血小板黏附,造成血小板計數的減少。目前在發達國家普遍使用真空采血系統,這一系統使標本在采血和測試期間完全與外界隔離,避免空氣或異物污染血液,也防止發生溶血,提高檢測準確性,同時也防止采血及檢驗人員因直接接觸血液而受到感染的危險。
3、抗凝劑
國際血液標準化委員會(ISCH)推薦使用的抗凝劑是EDTA二鉀,含量規定為1.5-2.2mg/ml血。此抗凝劑不影響白細胞計數及大小,對紅細胞形態影響也最小,并且可以抑制血小板的聚集。EDTA二鈉用于血常規檢查與EDTA二鉀抗凝血的結果相比無明顯變化,但其溶解度較低,抗凝速度慢,不適合末梢血的抗凝。
需要注意的是EDTA二鉀可以使紅細胞體積輕度膨脹,采血后短時間內MPV非常不穩定,半小時后方趨于平穩。枸櫞酸鹽類抗凝劑對MPV及其他凝血因子影響極小,可用于血小板的分析。
4、稀釋標本
在使用半自動血液分析儀時,血液需要經過預稀釋以后方能檢驗,應特別注意稀釋溶血現象。稀釋溶血是指血液經高倍稀釋后,隨著放置時間的延長血細胞自行溶解的現象。所以血液稀釋后應盡快測定,以避少數量的減低。
5、溶血標本對分析結果的影響
由于標本的處理不當,例如采血不順利、劇烈震蕩等,可以造成標本試管內溶血。溶血嚴重的標本可以使紅細胞和血球壓積下降、血紅蛋白相對增加,導致MCH和MCHC增高,而平均紅細胞體積正常。這一結果可以使臨床醫生作用錯誤的判斷,造成不良后果。所以對于溶血的標本,應重新采集標本后測定。
6、存放時間對結果的影響
抗凝全血在室溫的條件下進行儀器測定,紅細胞、白細胞和血小板各項指標可以穩定24個小時,白細胞分類可穩定6-8小時,血紅蛋白可穩定數日。但如果在顯微鏡下進行白細胞分類,兩小時后粒細胞形態即有變化,所以如果需要做顯微鏡形態學檢查,應及早推制血片。雖然4攝氏度條件可延長血液儲存期,但血小板不宜在低溫下儲存,會影響計數和體積,因此如不能及時檢測血液應在室溫下保存。
很多文獻報道EDTA鹽抗凝的靜脈血,在采血后的一小時內檢測MPV不穩定,血小板體積逐漸增高,可增大20%左右,一小時后趨向平穩,在1-6小時內變化小于3%。這是由于血液與EDTA鹽抗凝劑混合后,血小板形狀由凹形變為球形,體積增大的原因。所以為了結果的準確性,應該在一小時后進行測定。
我們發現用EDTA抗凝的末梢血也應至少在15分鐘以后進行測定,因為在這段時間內有些標本血小板暫時的聚集現象,使血小板計數假性減少,這不僅影響血小板其它指標的準確性,也造成白細胞計數有所增高。取血后立刻檢測,標本的血小板和白細胞體積分布直方圖也是異常的,放置一段時間后再測定就可得到分布正常的直方圖。
7、溶血劑的用量及溶血時間
全自動血液分析儀可以控制溶血劑的加入量及溶血劑作用時間。但在使用半自動血細胞計數儀進行血細胞計數時,需要在血液預稀釋后人工加入溶血劑,溶血以后再進行血細胞計數和分類計數,正確掌握溶血劑用量及溶血時間非常重要。如果加入量不足或加入后放置時間過短,可以造成溶血不完全,使未溶解的紅細胞計入白細胞中,造成白細胞假性增加。溶血不完全也可影響血紅蛋白的準確性。如果加入溶血劑量過多或放置時間太久白細胞明顯變形,使白細胞直方圖異常,白細胞分類計數結果不準確,甚至不能進行分類計數。
二、生理狀態及其它因素對實驗結果的影響
1、生理狀態
除很多病理情況下可引起血細胞計數的變化外,很多生理狀態也可以引起各項參數的變化。如妊娠的婦女和新生兒白細胞總數明顯增多;炎熱和寒冷常引起一過性白細胞總數增多;大量吸煙的人因血液一氧化碳增高其血紅蛋白含量可以明顯增加;每天不同時間白細胞總數也有一定差異。
2、儀器的影響
血液分析儀對環境要求較高,應遠離放射、核磁、放療加速器等大型醫療設備科室,以防止電信號的干擾。如果實驗室的電壓不穩,應安裝穩壓裝置,防止儀器產生大量的電噪音,干擾血小板計數結果。
對一起的吸樣針、液體管道、計數池等應定期用酶清洗劑或5%次氯酸鈉進行徹底清洗,防止蛋白堆積。如果計數小孔周圍有蛋白堆積,可影響細胞體積測定,造成MCV增高。如果血紅蛋白比色池污濁可影響血紅蛋白定量結果。
3、試劑因素的影響
目前國內有一些廠家能生產具有白細胞分類功能的血液分析儀。國外廠商均要求使用與其配套的稀釋液和溶血劑,甚至對清洗劑也有一定的要求,增加試驗成本。但是如果隨意改用其它廠家的試劑或使用自己配制的試劑,雖然對紅細胞、白細胞和血小板的計數不會有明顯的影響,但是對白細胞分類計數和細胞體積的測定的影響會很大,有些還會影響血紅蛋白的測定,使得多項血細胞分析指標不準確,如MCV、HCT、HGB、MCH、MCHC、RDW、MPV、PVT、PDW血細胞分類及其異常警告的提示等。