熒光分光光度法在黃曲霉毒素含量測定上的應用

摘要： 熒光分光光度法是對熒光物質進行定性和定量的有效方法。目前國家標準對于測定食品中黃曲霉毒素含量的方法以免疫親和層析法為主，其中熒光分光光度法是一個比較常用的方法。

本文依據國家標準G B/T 18979-2003《食品中黃曲霉毒素的測定 免疫親和層析凈化高效液相色譜法和熒光光度法》和G B 5413.37-2010《乳和乳制品中黃曲霉毒素M 1的測定》中的親和免疫層析凈化熒光光度法，應用港東F-380型熒光分光光度計對食品中黃曲霉毒素含量進行測定。結果證明此方法操作簡便，線性良好是測定食品中黃曲霉毒素含量的理想方法。

關鍵詞：  熒光分光光度法  黃曲霉毒素  免疫親和層析  食品  乳品

· 原理

試樣經過甲醇-水提取，提取液經過濾、稀釋后，濾液經過含有黃曲霉毒素特異的免疫親和層析凈化，此抗體對黃曲霉毒素B 1 、B 2 、G 1 、G 2 、M 1 具有專一性，黃曲霉毒素交聯在層析介質中的抗體上。用水將免疫親和柱上雜質除去，以甲醇通過免疫親和層析柱洗脫，加入溴溶液衍生，以提高測定靈敏度 。 洗脫液通過熒光光度計測定黃曲霉毒素（B1+B2 +G1 +G2）總量及黃曲霉毒素M1的量。

· 實驗條件

儀器及附件：

天津港東 F-380 型熒光分光光度計

熒光石英比色皿

分析條件：

激發波長：360nm

發射波長：450nm

藥品： 

樣品前處理試劑：甲醇（色譜純）、氯化鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、氯化鉀；

樣品衍生溶液：溴溶液儲備液（0.01%）、溴溶液工作液（0.002%）；

標準校正溶液：二水硫酸奎寧、硫酸；

黃曲霉毒素標準品：B 1 、B 2 、G 1 、G 2 、M 1。

其它： 

分析天平（0.0001g）、三角瓶、容量瓶、高速均質器（18000r/min～22000r/min）、定量濾紙、移液管、玻璃注射器、黃曲霉毒素免疫親和柱（B 1 、B 2 、G 1 、G 2 總量柱和M 1柱）、空氣壓力泵、離心機（轉速≥7000轉/分鐘）、玻璃試管等。

· 樣品及標準樣品的制備

樣品的提取：

（1）樣品提取流程圖

（2）樣品提取流程圖對應各實驗環節加入溶液的量

免疫親和層析凈化：

（1）免疫親和層析凈化流程圖

（2）免疫親和層析凈化流程圖對應各實驗環節加入溶液的量

標準樣品待測液制備：

（1）國標方法

在激發波長360nm，發射波長450nm條件下，以0.05mol/L硫酸溶液為空白，調節熒光光度計的讀數值為0.0μg/L；以熒光光度計溶液校準溶液（硫酸奎寧溶液）調節熒光光度計的讀數值為20.0μg/L（乳和乳粉中讀數值為2.0μg/L）。

（2）標準曲線法

用苯-乙腈（98+2）溶液配制黃曲霉毒素標準溶液0.100mg/mL（100μg/mL），分別準確吸取黃曲霉毒素標準溶液0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL分別置于10mL容量瓶中，用苯-乙腈（98+2）定容,配制成濃度為5.0、10.0、15.0、20.0μg/mL的黃曲霉毒素標準曲線工作液。

· 測定結果

應用F-380型熒光分光光度計的“光度測定”模塊建立黃曲霉毒素的標準工作曲線，并進行樣品測定。

· 結論

采用熒光分光光度法測定食品中黃曲霉毒素含量，操作簡單，方法準確，是一種理想的方法。

應用免疫親和層析凈化熒光分光光度法，建立黃曲霉毒素標準工作曲線所測試的數據比免疫親和層析凈化熒光光度法，硫酸及硫酸奎寧溶液校正黃曲霉毒素含量所得到的數據更加準確。