中壓制備液相色譜在兒茶素和茶黃素單體分離制備中研究

茶葉中多酚類物質占茶葉干重的18%～36%,主要包括黃烷醇類、黃酮和黃酮苷類、花青素和花白素以及酚酸和縮酚酸。兒茶素屬黃烷醇類,其含量占茶鮮葉干重的12%～24%,占多酚總量的70%～80%。茶黃素是紅茶中的主要成分,在紅茶加工過程中主要由兒茶素配對氧化而成,含量占紅茶干重的1%～5%。兒茶素和茶黃素不僅是茶葉滋味的主要成分,而且還是飲茶有益健康的重要活性成分,它們具有明顯的抗氧化、清除自由基、抗血脂、抑菌殺菌、抗過敏、防止動脈粥樣化、抗輻射等作用。隨著當前兒茶素和茶黃素生物活性和藥理功能研究的不斷深入,兒茶素和茶黃素單體分離純化的研究顯得越發突出,因此尋找一種簡單易行、高效低成本的方法來制備兒茶素和茶黃素單體具有重要的現實意義。

本文在查閱國內外大量文獻的基礎上,探索并成功創立了以中壓制備液相色譜(MPLC)來分離制備兒茶素單體以及茶黃素單體的方法。

論文具體的研究內容和取得的結果如下： 1.通過查閱大量文獻,對目前國內外已有的分離制備兒茶素和茶黃素的方法展開了綜述。分析比較了硅膠柱色譜法、凝膠柱色譜法、吸附樹脂法、高效制備液相色譜法以及高速逆流色譜法在兒茶素及茶黃素分離純化中應用的優缺點。MPLC介于高效制備液相色譜和常壓柱色譜之間的一種較新的制備液相色譜,它具有上樣量較大、分離快速高效、成本低廉的優勢,適用于單體的小規模快速分離制備。 2.以自制茶多酚(多酚含量92.6%)為原料,以反相C18為填料,使用MPLC方法對兒茶素進行分離純化研究,用95min得到四種主要兒茶素單體,純度分別為：表沒食子兒茶素(EGC)：91.8%；表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG):97.6%:表兒茶素(EC)：97.7%；表兒茶素沒食子酸酯(ECG)：99.3%。四種主要兒茶素純品得率56.0%,總回收率達到68.2%。 3.以自制茶色素(茶黃素含量65.2%)為原料,以反相C18為填料,使用MPLC方法對茶黃素進行分離純化,用190min一步分離得到茶黃素(TF1)、茶黃素單沒食子酸酯[TF2a,2b,為茶黃素-3-單沒食子酸酯(TF2a)和茶黃素-3'-單沒食子酸酯(TF2b)的混合物]、茶黃素雙沒食子酸酯(TF3)三種茶黃素純品,純度分別為TF1:92.6%； TF2a.2b:98.9%；TF3:98.7%、三種茶黃素純品得率51.5%,總回收率達79.0%。 4.為了使TF2a和TF2b完全得以分離,以獲得TFI、TF2a、TF2b、TF3四種主要茶黃素單體。通過進一步條件優化,以茶色素為原料,用MPLC方法經550min分離后,一次性成功得到TF1、TF2a、TF2b、TF3四種主要茶黃素單體,純度分別為TF1:92.6%；TF2a:96.5%；TF2b:94.8%；TF3:98.7%。四種茶黃素單體得率為53.5%,總回收率達82.1%。 5.論文對分離制備得到的兒茶素單體進行了波長掃描、1H-NMR和13C-NMR檢測分析以及質譜分析,對茶黃素單體進行了波長掃描、1H-NMR和13C-NMR檢測分析,確證所得產品為相應單體。