凝膠色譜是以多孔凝膠為固定相,利用凝膠孔的空間尺寸效應,使不同大小的分子達到分離的一種高效液相色譜(HPLC)方法。其分離機理類似于分子篩效應,大體積分子只能滲入少量大孔,在固定相中所經歷的路徑較短,先流出。所有孔隙都不能進入的大體積分子,不被保留,在死體積處流出。因此,溶質按分子體積從大到小依次流出色譜柱。在凝膠色譜中,流動相只起溶解樣品的作用,以有機溶劑為流動相的凝膠滲透色譜(GPC)應用較多,而以水為流動相的凝膠過濾色譜(GFC)的應用相對較少,這主要是因為水溶性大分子不僅可以溶于水,通常也能溶于有機溶劑中。四氫呋喃、氯仿、甲苯和二甲基甲酰胺等非極性有機溶劑是最常用的流動相。在凝膠色譜中,固定相表面與溶質分子間不存在化學相互作用,即固定相是惰性多孔材料。目前凝膠色譜固定相主要使用半硬質凝膠(如聚苯乙烯凝膠)和硬質凝膠(如多孔硅膠和多孔玻璃珠)。軟質凝膠(如葡聚糖)因不耐壓,通常只用于低壓凝膠色譜。凝膠色譜主要用于高分子化合物的分子量及其分布的測定、中小分子有機物的分離與定量分析、生物大分子純化(制備凝膠色譜)、凝膠色譜指紋圖譜(如原油及其重質組分的評價)和樣品凈化。凝膠滲透色譜(GPC)用于樣品凈化的主要目的是為后續分析除去干擾物質(如大分子基體物質)或對樣品進行濃縮。目前, GPC凈化所用凝膠柱尺寸比用于GPC分析的要大。GPC樣品凈化采用的操作方式主要是為了分析生物樣品中的小分子有機物而除去脂肪、蛋白質等大分子干擾物質;有時為了采用液質聯用技術(HPLC-MS)等技術分析生物大分子,也可采用GPC除去樣品中的小分子或脫鹽。GPC除去大分子物質選擇的固定相的孔徑應該比較小,大分子難以進入孔道內,快速流出凝膠柱;而目標小分子可以進入孔道,在大分子物質之后流出,從而實現分離。
基質比較復雜或者含有雜質較多的樣本(如含有大量的油脂,色素,生物堿等),經過凝膠色譜凈化雖然可以除去大部分大分子雜質,但是,與農藥分子大小相近的雜質卻無法去除,對剩余的這一部分雜質需要使用其它凈化技術......
凝膠是凝膠色譜的核心,是對組分進行分離的基礎。已經研制和使用過的凝膠很多,制備工藝、使用技術和條件也各有不同。根據凝膠材料的來源可以分為有機凝膠和無機凝膠;根據制備方法可以分為均勻、半均勻和非均勻三種......
凝膠色譜作為一種分離技術最早出現在1959年,porath和flodni用交聯的縮聚葡糖制成凝膠,成功分離了水溶液中不同分子量的化合物。隨后凝膠色譜技術在生物化學研究領域中迅速推廣應用,成為生物化學研......
凝膠色譜是以多孔凝膠為固定相,利用凝膠孔的空間尺寸效應,使不同大小的分子達到分離的一種高效液相色譜(HPLC)方法。其分離機理類似于分子篩效應,大體積分子只能滲入少量大孔,在固定相中所經歷的路徑較短,......
GPC是凝膠滲透色譜,又稱為尺寸排阻色譜,它是基于體積排阻的分離機理,通過具有分子篩性質的固定相,用來分離相對分子質量較小的物質,并且還可以分析分子體積不同、具有相同化學性質的高分子同系物。擴展資料凝......