紫外-可見分光光度法測定漢麻果膠中總皂苷的含量
摘要：目的建立漢麻果膠中總皂苷含量的測定方法。方法以蕨麻苷Ⅱ號為對照品，5％香草隆冰醋酸和高氯酸的混合溶液為顯色劑，采用紫外分光光度法在500衄處測定漢麻果膠總皂苷的含量。結果蕨麻苷Ⅱ號檢測濃度在70～177ug與吸光度呈良好的線性關系(r=0.9993)；平均加樣回收率為99.0％，RSD=1.7％(n=6)。結論本方法簡便，可操作性強，靈敏度高，是漢麻果膠總皂苷含量測定的一個切實可行的方法，為漢麻果膠有效部位的進一步研究提供依據。
關鍵詞：漢麻果膠；總皂苷；蕨麻苷Ⅱ號；紫外-可見分光光度法
1儀器和試藥
CarySO Bio紫外可見分光光度計(Varian AustraliaP1、Y LTP)；AL204電子分析天平(梅特勒一托利多儀器有限公司)；R501B旋轉蒸發器；硅膠G板(規格：100 mm×200 mm，)；
冰醋酸、高氯酸、甲醇等均為分析純；香草醛為化學純。漢麻果膠(取自鮮莖皮桿分離和干莖皮桿分離時脫下的粉狀物質，云南軍用漢麻材料研究中心)；蕨麻苷II(解放軍第302醫院中藥研究所制備并鑒定，其化學名稱為：2α，3β，19β-三羥基-烏蘇酸-28-O-β肛毗喃半乳糖苷，經HPLC歸一化法計算純度>98％)。
2方法
2.1對照品的選取
目前國內尚無漢麻果膠皂苷類成分的法定對照品，因此本實驗對對照品的選取進行了研究。將漢麻果膠醇提液用D101大孔樹脂進行初分離，依次用水，30％、70％、80％和95％的乙醇進行梯度洗脫，各洗脫液濃縮至干，加甲醇溶解，進行薄層層析，結果顯示，當以本實驗室自行分離制備的蕨麻苷Ⅱ為對照品時，經三氯甲烷一甲醇(8．5：1．5)展開之后，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇，于105℃加熱至斑點顯色清晰，發現在品值為0.32處，95％洗脫液部分與對照品出現相同的藍紫色斑點，說明原藥中存在與對照品相同或結構類似成分，因此選取蕨麻苷Ⅱ為對照品。
2.2對照品溶液的制備
精密稱取干燥至恒重的蕨麻苷Ⅱ對照品7 mg，置于2 mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，使含蕨麻苷Ⅱ的濃度為3.5 mg·mL-1。
2.3供試品溶液的制備
稱取漢麻果膠粉末1 kg，分別加入8、5、4倍量80％乙醇回流提取3次，每次1.5 h，合并3次濾液，于旋轉蒸發儀上(65～70℃)回收溶劑至無醇味，加乙醇至含醇濃度為30％(相當于含有0.4 g原生藥·mL-1)，靜置24 h，取上清液50 mL轉移至蒸發皿中蒸干溶劑，用甲醇溶解，溶液轉移至250 mL容量瓶中，并用甲醇定容，稱重，超聲20 min，放冷，再稱重。用甲醇補足重量，搖勻，用0．45 um微孔濾膜過濾，取續濾液，備用。
2.4最大測定波長的選擇
精密吸取對照品溶液25uL，供試品溶液200uL和甲醇25uL，分別置于10 mL具塞試管中，揮干甲醇，精密加入新配制的5％香草醛一冰醋酸與高氯酸混合溶液(2:8)2mL，密塞，搖勻。置于70℃水浴中加熱15 min，取出立即用冰水冷卻終止反應，精密加入乙酸乙酯5.0 mL稀釋，搖勻，直接檢測，以甲醇為空白，照紫外-可見分光光度法(中國藥典2010年版第二部附錄IVA)于400～800nm波長內進行掃描，結果對照品和供試品均在可見光區500 nm處具有最大吸收峰，故確定500nm作為測定波長，結果見圖1。
2.5標準曲線的繪制
分別精密吸取蕨麻苷Ⅱ對照品溶液20、25、30、35、40、45、50uL，置于10 mL具塞試管中，揮干甲醇，按“2．4”項下方法操作，以甲醇為空白，照紫外-可見分光光度法(中國藥典2010年版第二部附錄ⅣA)在500 nm處測定吸光度，以吸光度A為縱坐標。蕨麻苷Ⅱ濃度C(ug)為橫坐標繪制標準曲線，回歸方程為：A=0.0046C-0.1436，r=0.999 3，吸光度與濃度在70～177ug呈良好的線性關系。