非同位素分析報道基因活性實驗—

報告基因是一種編碼可被檢測的蛋白質或酶的基因，也就是說，是一個其表達產物非常容易被鑒定的基因。把它的編碼序列和基因表達調節序列相融合形成嵌合基因，或與其它目的基因相融合，在調控序列控制下進行表達，從而利用它的表達產物來標定目的基因的表達調控，篩選得到轉化體。

實驗材料	轉染細胞
試劑、試劑盒	PBS 熒光素貯液 Triton 甘氨酰甘氨酸
儀器、耗材	橡膠細胞刮子繪圖儀比色杯
實驗步驟	1. 用冰冷的PBS洗滌在3個60 mm 培養皿中的轉染了熒光素酶表達質粒的細胞各3次，毎次用4 ml PBS洗后吸去洗液。 2. 每個培養皿中加入350 μl Triton/甘氨酰甘氨酸裂解液。用橡皮刮子刮下細胞，將溶解的細胞轉入1.5 ml 微量離心管中。4℃以最大速度微量離心5 min。將上清（細胞裂解液）轉入一個干凈的微量離心管中，置于冰上以備分析。 3. 在旋渦混合器上輕輕振蕩細胞裂解液，取100 μl 置于發光計的比色杯中。加入360 μl 熒光素酶分析緩沖液。將比色杯放入發光計的杯箱中。 4. 用25 mmol/l ，pH7.8的甘氨酰甘氨酸稀釋熒光素貯液至200 μmol/l。 5. 往發光計里的樣品注入200 μl 稀釋的熒光素溶液，25℃測量20 s 內的光輸出量，減去儀器的背景（背景為比色杯中不加細胞裂解液時的光輸出量測定值），以及比較每個樣品的生物發光值與商品熒光素酶標準品的值而進行定量。