實驗方法原理 | 單級質譜測序是分析肽段的階梯序列,即相鄰肽段間相差一個氨基酸殘基,用質譜分析肽階梯,通常用 MALDI-TOF,MS 分析。 MS/MS 測序用的是上文所述用于數據庫檢索的 CID 譜,但碎片離子由人工完全解析。 用于MS 序列分析的肽階梯是由化學或酶法降解肽段產生,由 C 未端或N未端斷裂。測定N末端序列的化學方法應用Edman化學反應,用MS或 MS/MS 讀出產生的變短的肽。這一方法通常被稱為“階梯測序'。在這種方法上發展了兩種變化方式。 |
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實驗材料 | |
儀器、耗材 | |
實驗步驟 | 第一種方法是任每一測序循環開始時,在多肽/蛋白質底物內加 Edman 試劑,每一個循環中有一小部分的底物袚 N 末端封閉,末端封閉后的肽在下一個循環中不會參加反應,這祥就產生了序列階梯,最終反應產物混合物經 MALDI-MS 分析,其質量數之差反映了氨基酸殘基的質量數。 |