1. 準備兩個小量預試驗反應以確定最佳溫育時間： （1）反應1：20 μl 含有1 μl 200 μg/ml Xa因子的1 mg/ml 融合蛋白，室溫下反應
（2）反應2：5 μl 不含因子Xa的1 mg/ml 融合蛋白（模擬消化），室溫下反應。 2. 分別在2、4、8和24 h取出5 μl 反應液，加2×SDS樣品緩沖液5 μl，-20℃下凍存。
3. 在24 h 時，將5 μl 反應2（模擬消化）液與5 μl 2×SDS樣品緩沖液混合。
4. 將5 μl 原始融合蛋白溶液與5 μl 2×SDS樣品緩沖液混合。 5. 將所有樣品于沸水浴中加熱10 min，加樣到SDS-聚丙烯酰胺凝膠上電泳，根據裂解程度確定適當的溫育時間。 6. 確定了適當的裂解條件后，將余下的融合蛋白樣本按比例擴大反應，僅留小量的未裂解融合蛋白作對照用。以SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳監測裂解程度。 展開 | 