透析法濃縮蛋白質溶液

透析法主要用于更換蛋白質的緩沖溶液，如果在真空或吸濕環境中也可作為濃縮蛋白質溶液的一種方法（例如 PEG、Sephadex）。將蛋白質溶液盛在一個半透膜袋內，此膜能防止蛋白質丟失而無論在常壓或減壓下可與周圍的緩沖溶液進行溶質交換。

除小體積樣品之外，根據擴散原理進行的透析法非常耗時，因此蛋白質濃縮和交換緩沖液通常采用超濾法。然而，再不受時間限制情況下，也可選擇透析。因為透析袋已成商品化，不需花時間準備，也不需要特殊儀器。

蛋白質溶液

燒杯磁力攪拌器和攪拌子透析管

Sephadex G-100 或 G-200

1. 準備透析袋

市售的透析袋含有化學雜質。為了除去這些雜質，通常要用 10 mmol/L 碳酸氫鈉（NaHCO₃/1 mmol/L EDTA 溶液煮沸透析袋 30 min。有人建議進行更多的處理。煮沸之后，應該用雙蒸水充分洗滌透析袋。洗畢，在貯存于 1 mmol/L EDTA 溶液中，以防止微生物的污染。每隔半年必須制備新的透析袋。Spectrum（公司）提供了一系列透析膜（Spectra/Pro 7），這種透析膜由再生的纖維素經處理后制成，已經除去了重金屬和硫化物。

2. 在透析袋的一端打兩個死結；

3. 用移液管或漏斗將蛋白質溶液移入透析袋內；

4. 在透析袋的另一端打兩個死結并將器其放入 10 倍蛋白質溶液以上體積的緩沖液中，用磁力攪拌器緩慢攪拌以促進溶液交換。透析數小時后，透析達到平衡。透析緩沖液需要更換數次，使原有緩沖液成分逐漸減少。

5. 透析緩沖液

為了濃縮蛋白質，透析袋應放入 20％ 聚乙二醇或 5％ 或乙二醇緩沖液中。然而，在使用 PEG 時，經常伴隨有雜質進入透析物中，而需進一步的純化處理。濃縮蛋白質溶液，較為迅速的方法是在 4℃ 將透析袋埋入 Sephadex G-100 或 G200 樹脂中，3 h 后蛋白質溶液可濃縮 5 倍。

1. 常使用市售的透析夾（Spectrum），從而替代透析袋打結。

2. 如果用此蛋白質溶液濃度更低的鹽溶液或有機溶液進行透析，由于滲透壓的作用，常導致水溶液進入透析袋。所以，應留有增加溶液體積的空間，以免透析膜破裂。

3. 可選擇透析袋分子量截流范圍是 100～300 000 Da（Spectrum Medical 說明書）。

4. 用微量透析袋進行小體積透析（10ul～0.6 ml）。