亮氨酸氨肽酶的測定實驗

酶樣品

Tris-HCl氯化鎂亮氨酸亮氨酰

分光光度計

實驗所需「試劑」具體見「其他」

1. 加樣

2. 計算

25℃ 時，于 238 nm 處吸收值降低。

空白對照用 0.8 ml 0.0625 mol/L 亮氨酸代替亮氨酰，并且忽略實驗混合物中的水量。

于 238 nm（am＝吸收值/亮氨酰濃度）處，借助于校準曲線可測得酶的活性。

試劑：

0.5 mol/L Tris-HCl，pH 8.5

0.025 mol/L 氯化鎂（MgCl₂·2H₂O，Mr＝161.9；40.5 mg 溶于 10 ml 水中）

0.1 mol/L 氯化鎂（MgCl₂·6H₂O，Mr＝203.3；203 mg 溶于 10 ml 水中）

0.0625 mol/L 亮氨酸（Mr＝131.2；820 mg 溶于 100 ml 水中，調至 pH 8.5）

0.125 mol/L 亮氨酰（亮氨酰鹽酸，Mr＝166.7；2.08 g 溶于 100 ml，調至 pH 8.5）

酶樣品 ［LAP（0.1 ml 約相當于 0.4 mg）必須在 37℃ 激活，在使用前先在 0.05 ml 0.025 mol/L MnCl₂、0.05 ml 0.5 mol/L Tris-HCl pH 8.5、0.8 ml 水的混合物中培養 2 h］