1. 取出肝臟，注意不要弄破膽囊。放進一置于冰上的燒杯中，剪去任何結締組織。稱其質量后放回燒杯中。用鋒利的剪刀、手術刀或剃須刀片將之切成 1~2 mmol/L 的薄片，用勻漿緩沖液（1x MS) 沖洗兩次以去除大部分的血。轉移至勻漿器中。加入足夠的勻漿緩沖液，制備 1:10 的勻漿。
1 x MS（勻漿緩沖液）
210 mmol/L 甘露醇
70 mmol/L 蔗糖
5 mmol/L Tris-HCl，pH 7.5
1 mmol/L EDTA，pH 7.5
2. 在一較冷的房間里，使研杵以 500 r/min 的速度轉動進行勻漿，直到僅留下結締組織。通常需要 2~6 次研磨。
3. 將勻漿轉至離心管中，用少量緩沖液清洗勻漿器內壁并加至離心管中（如果后面要進行標志酶檢測，還要留下一些勻漿），1300 g 離心 10 分鐘以沉淀末破碎的細胞。細胞核、細胞質膜和結締組織纖維。
4. 將上清移至干凈試管中，置冰上保存。
5. 用起始體積一半的勻漿緩沖液重懸浮沉淀，1300 g 離心 10 分鐘。
6. 取出上清片加到第 4 步的上清中。
7. 兩次的上清一起 1300 g 離心 10 分鐘。收集上清，再次離心。
8. 收集上清，17000 g 離心 15 分鐘以沉淀線粒體。
9. 棄去上清，用 Kimwipe 清除離心管內壁粘連的脂肪和碎片。
10. 用緩沖液懸浮并在 17000 g 離心 15 分鐘，漂洗線粒體兩遍。
11. 將最終的沉淀用一定體積的適于后續工作的緩沖液懸浮。 | 