1. 取新鮮雞血以0.85%生理鹽水制成10%的懸液。
2. 稱取0.5克PEG(MW=4 000)放入試管內,在酒精燈上融化之,迅速加入0.5 ml 預熱的Hanks液混勻制成50%的PEG溶液。放入37℃水浴中待用。
3. 取上述10%的雞紅細胞懸液1 ml 放入離心管中,再加入5 ml Hanks液混勻,然后以1 000 rpm 離心5分鐘,小心棄去上清,用指彈法將細胞團塊彈散。
4. 取上述50%PEG溶液0.5 ml,在1分鐘內滴加到雞紅細胞懸液,邊加邊輕輕搖動混勻。待PEG全部加入后靜置1分鐘左右。此全部過程都要求在37℃水浴內進行。
5. 緩慢滴加9 ml Hanks液以終止PEG的作用,在37℃水浴內靜置5分鐘。
6. 離心棄上清后,取一滴融合后的細胞懸液滴片,加蓋片鏡檢。
7. 結果觀察:在高倍鏡下可以看到有兩個或兩個以上的雞紅細胞膜融合在一起,形成一個異核體細胞。要注意辨別融合細胞與重疊的雞紅細胞。
8. 融合率的計算:在高倍鏡下隨機計數200個細胞(包括融合的與未融合的細胞),以融合細胞(含兩個或兩個以上的細胞核的細胞)的細胞核數除以總細胞核數(包括融合與未融合的細胞核)即得出融合率。公式如下:
 展開 |