一、試劑配制
1. 培養基的配制： RPMI 1640培養基 4ml 小牛血清 1ml 青霉素和鏈霉素 各100U/ml PHA 0.2ml 肝素 1小滴 以5％ NaHCO3調pH至7.2～7.4。4℃備用。
2. 肝素：稱取0.2g溶于100ml雙蒸水中，濃度為0.2％，滅菌。
3. 秋水仙素：生理鹽水配制成20μg/ml濃度，滅菌，分裝，置-20℃。
4. 低滲液：0.075 mol/L KCI
5. 固定液：甲醇:冰乙酸(3：1)，臨時配制。
6. Giemsa工作液：1份原液和9份磷酸緩沖液，臨時配制。
7. 磷酸緩沖液：1/15mol/L Na2HP4、1/15 mol/L KH2PO4等體積混合。
8. 5％NaHCO3火菌濾器抽濾備用。
二、實驗步驟
1. 接種，培養
（1）在無菌條件下，用滅菌注射器吸取0.2％肝素液(用生理鹽水配制，滅菌)0.2ml，濕潤針筒后，采靜脈血1～2ml、轉動注射器使血液與肝素充分混勻。
（2）無菌條件下，將肝素化血液滴入至外周血培養基內，每5ml培養液內滴入血滴28～30滴（7號針頭）輕輕混勻。
（3）置37℃恒溫箱內，靜止培養68～72h。注意第二天觀察培養液有無凝血、溶血或長菌的現象，可每天將培養液搖一搖以便細胞得到充分培養。
（4）終止培養前2~3h，加入濃度為20μg/ml的秋水仙素，每5ml培養基中用7號針頭，加3~4滴使最終濃度為0.1μg/ml。輕輕搖勻后，再放入恒溫箱內，繼續培養2~3h，以積累較多停止在中期的分裂象。
2. 制片
（1）收獲細胞：由恒溫箱取出培養瓶，用吸管充分吹打培養瓶瓶壁，使細胞全部脫離瓶壁，然后將細胞液移至錐形離心管內，1500轉/min，離心10min，去上清液。
（2）低滲處理：加入37℃預溫的0.075mol/L KCl 8ml，反復吹打(約一百次)后，置37℃水浴箱中低滲處理25min左右。
（3）預固定：加入新鮮制備固定液1ml（甲醇:冰醋酸=3:1），輕輕混勻。
（4）離心：2000轉/min，離心10min，吸棄上清液。
（5）固定：沿離心管壁慢慢加入固定液8ml，輕輕混勻，制成細胞懸液。 （6）離心：同上，吸去上清液。
（7）再固定：加固定液8ml，混勻，固定10mn。
（8）離心：同上，吸去上清液。。
（9）制細胞懸液：根據細胞量多少，加入適量固定液，充分混勻，制成細胞懸液。
（10）滴片：取出預先經冰水浸泡的載玻片，用吸管吸取混勻的細胞懸液在離冰片約30cm距離進行滴片，每片約滴2～3滴細胞懸液，使細胞較好分散。一般每一培養瓶可制3～5張標本片。
（11）染色：標本晾下后，即可用染液（Giemsa液原液1份，pH6.8的磷酸緩沖液9份）染色15min，自來水沖洗后（從背面沖洗）晾干。
3. 鏡檢：人類每個體細胞有46條染色體，根據染色體的長度和著絲粒位置的不同，可以分成22對常染色體和一對性染色體，男子是是46，XY；女子是46，XX。 展開 | 