細胞凋亡檢測實驗——AnnexinVFITC單染法

Annexin V-FITC

標記緩沖液PBS去離子水冰塊

移液器吸頭微量離心管可調速離心機載玻片蓋玻片流式細胞儀或熒光顯微鏡

1.  凋亡細胞的制備

小鼠腹腔注射地塞米松25 mg/kg體重，10 h后解剖取胸腺，分離胸腺細胞。用PBS洗兩遍，調整待測細胞的濃度為2×10⁶ /ml，備用。
 

2.  200 μl細胞懸液加入1 ml冷PBS，輕輕震蕩使細胞懸浮，1000 rpm 4 ℃離心10 分鐘，棄上清。
 

3.  重復步驟2兩次。
 

4.  將細胞重懸于200 μl 標記緩沖液。
 

5.  加入10 μl Annexin V-FITC，輕輕混勻，避光室溫反應15 分鐘或4 ℃反應30 分鐘。
 

6.  加入300 μl標記緩沖液，立即上機（流式細胞儀）檢測。

1.  整個操作過程動作要盡量輕柔，切勿用力吹打細胞，盡量在4 ℃下操作。

2.  反應完畢后要盡快檢測，因為細胞凋亡是一個動態的過程，反應一小時后熒光強度就開始衰變。
 

3.  Annexin V-FITC是光敏物質，在操作時要注意避光。




 

一、實驗結果

用熒光顯微鏡觀察，凋亡細胞細胞膜上可見黃綠色光環。PS轉移到細胞膜外不是調亡所特有的，也可發生在細胞壞死中。以FITC標記的Annexin V, 可以同時結合使用PI（碘化丙啶）拒染法，用流式細胞儀分析可檢測凋亡細胞的百分率。