1. 實驗前一天,將細胞接種于新鮮培養基。對數生長期細胞可更好地滲入 [3H]-胸腺嘧啶脫氧核苷。
2. 收獲細胞,在新鮮培養基中以 1X106 細胞/ml 重懸,用 5 μCi/ml [3H]-胸腺嘧啶脫氧核苷標記 2~4 小時。或者,用 1 μCi/ml [3H]-胸腺嘧啶脫氧核苷過夜標記較低密度的細胞。
3. 用 HBSS,PBS 或培養基將細胞洗 2 次,在培養基中重懸 0.2X106~1X106 細胞/ml 在開始前確定細胞已被標記。
4. 接種細胞于 96 孔平底組織培養板,用推定的凋亡誘導物孵育 5~18 小時。
5. 加 EDTA 至終濃度為 5 mmol/L,用合適的 96 孔板細胞收獲儀將細胞收獲至玻璃纖維濾器。
6. 在 80℃ 烘箱中 10 分鐘或微波 4 分鐘干燥濾器。
7. 在塑料袋中密封濾器,加入可生物降解的閃爍液至濾器完全浸潤,用 β 計數儀測定放射活性。
8. 按下式計算 DNA 片段含量:
DNA 片段(%)=100%X [1-(試驗值/對照值)]
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